D-Luciferin

1.시험관 내 생물발광 이미지 분석을 위한 예시 프로토콜
a) 멸균수에 100mM (100-200X) Luciferin 스톡 용액을 준비합니다. 잘 섞습니다. 즉시 사용하거나, 한 번 사용할 양만큼 나누어 -20℃에 보관하고, 동결-해동 주기를 피하며, 빛에 노출되지 않도록 합니다.
b) 미리 따뜻하게 데운 조직 배양 배지에 0.5-1mM D-Luciferin 작업 용액을 준비합니다.
c) 배양된 세포에서 배지를 흡인합니다.
d) 이 화합물 작업 용액을 세포에 추가하고, 이미징 직전 37℃에서 5-10분 동안 세포를 배양합니다.
2.생체 내 생물발광 이미지 분석을 위한 예시 프로토콜
a) Mg2+ 및 Ca2+가 없는 DPBS에 15mg/mL Luciferin 스톡 용액을 준비합니다. 잘 섞습니다.
b) 0.2 µm 필터를 통해 용액을 멸균 필터링합니다. 즉시 사용하거나, 한 번 사용할 양만큼 나누어 -20℃에 보관하고, 동결-해동 주기를 피하며, 빛에 노출되지 않도록 합니다.
c) 이미징 10-15분 전에 동물 체중의 150mg/kg (또는 이 화학 스톡 용액 10 µL/g)으로 루시퍼린을 복강 내 (i.p.) 주사합니다.
참고: 각 동물 모델에 대해 루시퍼린의 운동학적 연구를 수행하여 최고 신호 시간을 결정해야 합니다.
3.루시퍼린 리포터 분석을 위한 예시 프로토콜
a) 멸균수에 100mM Luciferin 스톡 용액을 준비합니다. 즉시 사용하거나, 한 번 사용할 양만큼 나누어 -20℃에 보관하고, 동결-해동 주기를 피하며, 빛에 노출되지 않도록 합니다.
b) 25mM 트라이신 완충액 pH 7.8에 3mM ATP, 1mM DTT 및 15mM MgSO4를 포함하는 1mM 이 화합물 작업 용액을 준비합니다.
c) 5-10 µL의 세포 용해물을 마이크로플레이트에 피펫팅합니다. 용해물이 없는 용해 시약 또는 완충액을 공백으로 사용합니다.
d) 루미노미터를 이 화학 작업 용액으로 프라이밍합니다.
e) 200 µL의 이 화합물 작업 용액을 지연 없이 10초 통합 시간으로 주사합니다.

면역적격 난소암 마우스 모델에서 D-Luciferin 기질과 반딧불이 루시페라아제는 생물발광 이미징이 체중 증가보다 종양 성장에 대한 더 민감한 지표이므로 종양-숙주 면역 상호작용을 보존합니다. [2]

• 동물 모델

  Female BALB/c nu/nu mice

• 용량

  75 mg/kg

• 투여

  s.c.