DAPT

APP751 유전자(HEK 293)로 형질 전환된 인간 배아 신장 세포(American Type Culture Collection CRL-1573)는 일상적인 Aβ 감소 분석에 사용됩니다. 세포는 96웰 플레이트에 접종되고 10% 열 불활성화 태아 소 혈청이 보충된 Dulbecco's modified Eagle medium (DMEM)에서 밤새 부착되도록 합니다. DAPT는 디메틸 설폭사이드(DMSO)에 스톡 용액에서 희석되어 최종 농도가 배지에서 0.1% DMSO와 같아지도록 합니다. 세포는 이 화합물로 37°C에서 2시간 동안 전처리되고, 배지는 흡인되며 신선한 화합물 용액이 적용됩니다. 추가 2시간 처리 기간 후, 조건 배지는 추출되어 총 Aβ에 특이적인 샌드위치 ELISA(266–3D6)로 분석됩니다. Aβ 생산 감소는 0.1% DMSO로 처리된 대조군 세포와 비교하여 측정되며 억제율로 표현됩니다. 최소 6개 용량의 복제 데이터는 XLfit 소프트웨어를 사용하여 4-매개변수 로지스틱 모델에 맞춰져 효능을 결정합니다. 인간 및 PDAPP 마우스 신경 세포 배양은 신경 특성을 향상시키기 위해 무혈청 배지에서 배양되었으며, 사용 전 성숙 후 90% 이상의 뉴런으로 나타났습니다. 기본 Aβ 값을 설정하기 위한 조건 배지는 각 웰에 신선한 배지를 추가하고 이 화학 물질이 없는 상태에서 37°C에서 24시간 동안 배양하여 수집됩니다. 그런 다음 배양액은 원하는 농도 범위의 이 화합물을 포함하는 신선한 배지로 37°C에서 추가 24시간 동안 처리되고, 조건 배지가 수집됩니다. 총 Aβ 측정의 경우, 샘플은 HEK 293 세포 분석에 사용된 것과 동일한 ELISA(266–3D6)로 분석됩니다. Aβ42 생산을 위한 샘플 분석은 Aβ42 C-말단에 특이적인 포획 항체를 사용하는 별도의 ELISA(21F12–3D6)로 수행됩니다. 총 Aβ 및 Aβ42의 생산 억제는 화합물 처리 및 기본 기간 값의 차이로 결정됩니다. 억제율을 이 화합물 농도에 대해 플로팅한 후, 데이터는 위와 같이 XLfit 소프트웨어로 분석하여 효능을 결정합니다.

SK-MES-1

2.5 μM to 160 μM

72 hours

Cells are seeded into 96-well plates and exposed to 0.1% DMSO or DAPT at concentrations in the range of 2.5 μM–160 μM for 72 hours. Cytotoxicity is determined with 3-(4, 5)-dimethylthiahiazo-(-z-y1)-3, 5-di-phenytetrazoliumromide (MTT) dye reduction assay with minor modifications. Briefly, after incubation with this compound, 20 μL MTT solution (5 mg/mL in PBS) is added to 180 μL medium in each well and plates are incubated for 4 hours at 37 °C, and subsequently 150 μL DMSO is added to each well, and mixed by shaking at room temperature for 15 minutes. Absorption is measured by an enzyme-linked immunosorbent assay at 490 nm to determine absorbance values. α-MEM supplemented with the same amount of MTT solution and solvent is used as blank solution. The IC50 value is calculated using PROBIT program in SPSS.

Heterozygous PDAPP transgenic mice overexpressing the APPV717F mutant form of the amyloid precursor protein.

≤100 mg/kg

Administered via p.o.