Dinaciclib (SCH 727965)

Dinaciclib은 또한 A2780 세포에서 티미딘(dThd) DNA 통합을 IC50 4 nM로 차단하는 강력한 DNA 복제 억제제입니다. 이 화합물은 >6.25 nM 농도에서 Ser 807/811의 Rb 인산화를 강력하게 억제하며, 이는 동일한 세포 모델에서 dThd DNA 통합의 50% 억제를 위해 4 nM 농도가 필요하다는 관찰과 일치합니다. 중요하게도, Rb 인산화의 완전한 억제는 p85 PARP 절단 산물이 >6.25 nM의 이 화학 물질에 노출된 세포에서 나타나는 것으로 보아 세포자멸사 발생과 관련이 있습니다. 이 화합물은 광범위한 인간 종양 세포주에 대해 활성을 나타냅니다. [1] 노출 중 이 화합물을 첨가하면 γ-H2AX 축적도 용량 의존적으로 억제됩니다. [2] 이 화합물은 흑색종 세포 증식을 억제하고 흑색종 세포를 대규모 세포자멸사로 유도합니다. [3] 이 화학 물질은 독소루비신에 내성이 있는 골육종 세포주를 포함한 여러 골육종 세포주의 세포자멸사를 유도합니다. RNAP II의 세린 2 인산화 및 CDK 억제제 p27^Kip1의 트레오닌 187 인산화를 약화시킵니다. 인산화 활성 감소는 이 화합물 12-40 nM (첨가 후 4-16시간)에서 발생합니다. 또한 Rb의 세린 807/811 인산화를 감소시킵니다. 이 화학 물질은 모의 및 p53 결핍 U2OS 세포의 세포자멸사를 유사한 정도로 유도합니다. [4]

Dinaciclib i.p. 투여를 10일 동안 매일 8, 16, 32, 48 mg/kg로 투여한 결과 종양 억제율은 각각 70%, 70%, 89%, 96%였습니다. 이 화합물의 MED(최소 유효 용량)는 <8 mg/kg인 것으로 보입니다. 이 화합물은 잘 내약성이 있으며, 가장 높은 용량군에서 최대 체중 감소는 5%였습니다. 이 화학 물질은 생체 내에서 용량 의존적인 항종양 활성을 가지며, MTD(최대 내약 용량) 미만의 용량 수준에서 종양 성장의 거의 완전한 억제가 발생합니다. 이 화합물은 마우스에서 짧은 혈장 반감기를 가집니다. [1]

• 사이클린/CDK 키나아제 분석

  재조합 사이클린/CDK 홀로효소는 특정 사이클린 또는 CDK를 발현하는 바큘로바이러스를 생산하도록 조작된 Sf9 세포에서 정제됩니다. 사이클린/CDK 복합체는 일반적으로 50 mM Tris-HCl (pH 8.0), 10 mM MgCl₂, 1 mM DTT 및 0.1 mM 오르토바나데이트 나트륨을 포함하는 키나아제 반응 완충액에 최종 농도 50 μg/mL로 희석됩니다. 각 키나아제 반응에 대해 1 μg의 효소와 20 μL의 2 μM 기질 용액(히스톤 H1에서 유래한 비오틴화 펩타이드)을 혼합하고 희석된 이 화합물 10 μL와 결합합니다. 반응은 50 μL의 2 μM ATP와 0.1 μCi의 ³³P-ATP를 첨가하여 시작됩니다. 키나아제 반응은 실온에서 1시간 동안 배양되며, 0.1% Triton X-100, 1 mM ATP, 5 mM EDTA 및 5 mg/mL 스트렙타비딘 코팅 SPA 비드를 첨가하여 중단됩니다. SPA 비드는 96웰 GF/B 필터 플레이트와 Filtermate 범용 수확기를 사용하여 포획됩니다. 비드는 2 M NaCl로 두 번 세척하고 1% 인산을 함유한 2 M NaCl로 두 번 세척합니다. 그런 다음 TopCount 96웰 액체 섬광 계수기를 사용하여 신호를 분석합니다.

• 세포주

  A2780 cells

• 농도

  0 μM -5 μM

• 배양 시간

  24 hours

• 방법

  A2780 cells are maintained in DMEM plus 10% fetal bovine serum and passaged twice weekly by detaching the monolayer with trypsin-EDTA. One hundred microliters of A2780 cells (5 × 10³ cells) are added per well to a 96-well Cytostar-T plate and incubated for 16 hours to 24 hours at 37 °C. Dinaciclib is serially diluted in complete media plus 2% ¹⁴C-labeled dThd. Media are removed from the Cytostar T plate; 200 μL of various this compound dilutions are added in quadruplicate; and the cells are incubated for 24 hours at 37 °C. Accumulated incorporation of radiolabel is assayed using scintillation proximity and measured on a TopCoun^TM.

• 동물 모델

  Nude mice bearing A2780 tumors

• 용량

  8 mg/kg, 16 mg/kg, 32 mg/kg, and 48 mg/kg

• 투여

  Administered via i.p.