데이터시트

생물학적 설명

특이성	E.coli LPS Antibody [M15H2]는 E.coli LPS를 특이적으로 검출합니다.
배경	E. coli LPS(지질다당류)는 그람 음성 세균 외막의 주요 구조 성분이자 강력한 내독소이며, 지질 A, 코어 올리고당, O-항원으로 구성되어 집합적으로 막의 무결성을 유지하는 동시에 알려진 가장 강력한 면역 자극 분자로 작용합니다. 지질 A는 6개의 지방산 사슬로 아실화된 이중 인산화 β-1',6-글루코사민 이당류로 고정되어 숙주 TLR4-MD-2-CD14 수용체 복합체에 의해 인식되는 독성 부분을 형성하며, 코어 영역은 막 안정화를 위해 하전된 인산/에탄올아민 그룹을 포함하는 Kdo-헵토스 당을 통해 연결되고, 반복되는 에피토프의 고도로 가변적인 O-항원 다당류 사슬은 혈청형 특이성과 식균 작용/보체 저항성을 통한 면역 회피를 부여하여 "매끄러운" 세균 형태를 만듭니다. LPS는 담즙산, 항생제 및 양이온성 펩타이드로부터 보호하는 필수 투과성 장벽을 형성하는 동시에 MyD88/TRIF 의존성 NF-κB 및 IRF3 경로를 통해 치명적인 선천 면역 활성화를 촉발하여 대량의 TNF-α, IL-1β, IL-6 사이토카인 폭풍을 유발하며, 이는 그람 음성균 혈증 동안 패혈성 쇼크, 파종성 혈관내 응고 및 다발성 장기 부전을 유발합니다. 장 전이로 인한 만성 저등급 내독소혈증은 지속적인 혈관 염증을 통해 죽상 경화증, 신경 퇴행성 질환 및 대사 증후군에 기여하며, LPS는 필수적인 세균 구조 요소이자 인류에게 가장 위험한 미생물 독소로 자리매김하고 있습니다.

특이성

E.coli LPS Antibody [M15H2]는 E.coli LPS를 특이적으로 검출합니다.

배경

E. coli LPS(지질다당류)는 그람 음성 세균 외막의 주요 구조 성분이자 강력한 내독소이며, 지질 A, 코어 올리고당, O-항원으로 구성되어 집합적으로 막의 무결성을 유지하는 동시에 알려진 가장 강력한 면역 자극 분자로 작용합니다. 지질 A는 6개의 지방산 사슬로 아실화된 이중 인산화 β-1',6-글루코사민 이당류로 고정되어 숙주 TLR4-MD-2-CD14 수용체 복합체에 의해 인식되는 독성 부분을 형성하며, 코어 영역은 막 안정화를 위해 하전된 인산/에탄올아민 그룹을 포함하는 Kdo-헵토스 당을 통해 연결되고, 반복되는 에피토프의 고도로 가변적인 O-항원 다당류 사슬은 혈청형 특이성과 식균 작용/보체 저항성을 통한 면역 회피를 부여하여 "매끄러운" 세균 형태를 만듭니다. LPS는 담즙산, 항생제 및 양이온성 펩타이드로부터 보호하는 필수 투과성 장벽을 형성하는 동시에 MyD88/TRIF 의존성 NF-κB 및 IRF3 경로를 통해 치명적인 선천 면역 활성화를 촉발하여 대량의 TNF-α, IL-1β, IL-6 사이토카인 폭풍을 유발하며, 이는 그람 음성균 혈증 동안 패혈성 쇼크, 파종성 혈관내 응고 및 다발성 장기 부전을 유발합니다. 장 전이로 인한 만성 저등급 내독소혈증은 지속적인 혈관 염증을 통해 죽상 경화증, 신경 퇴행성 질환 및 대사 증후군에 기여하며, LPS는 필수적인 세균 구조 요소이자 인류에게 가장 위험한 미생물 독소로 자리매김하고 있습니다.

사용 정보

응용

IF, ELISA

희석

IF

1:200

반응성

Escherichia coli

출처

Mouse Monoclonal Antibody

MW

보관 완충액

PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

보관
(수령일로부터)

-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

실험 방법
IF	Experimental Protocol: Sample Preparation 1. Adherent Cells: Place a clean, sterile coverslip in a culture dish. Once the cells grow to near confluence as a monolayer, remove the coverslip for further use. 2. Suspension Cells: Seed the cells onto a clean, sterile slide coated with poly-L-lysine. 3. Frozen Sections: Allow the slide to thaw at room temperature. Wash it with pure water or PBS for 2 times, 3 minutes each time. 4. Paraffin Sections: Deparaffinization and rehydration. Wash the slide with pure water or PBS for 3 times, 3 minutes each time. Then perform antigen retrieval. Fixation 1. Fix the cell coverslips/spots or tissue sections at room temperature using a fixative such as 4% paraformaldehyde (4% PFA) for 10-15 minutes. 2. Wash the sample with PBS for 3 times, 3 minutes each time. Permeabilization 1.Add a detergent such as 0.1–0.3% Triton X-100 to the sample and incubate at room temperature for 10–20 minutes. (Note: This step is only required for intracellular antigens. For antigens expressed on the cell membrane, this step is unnecessary.) Wash the sample with PBS for 3 times, 3 minutes each time. Blocking Add blocking solution and incubate at room temperature for at least 1 hour. (Common blocking solutions include: serum from the same source as the secondary antibody, BSA, or goat serum.) Note: Ensure the sample remains moist during and after the blocking step to prevent drying, which can lead to high background. Immunofluorescence Staining (Day 1) 1. Remove the blocking solution and add the diluted primary antibody. 2. Incubate the sample in a humidified chamber at 4°C overnight. Immunofluorescence Staining (Day 2) 1. Remove the primary antibody and wash with PBST for 3 times, 5 minutes each time. 2. Add the diluted fluorescent secondary antibody and incubate in the dark at 4°C for 1–2 hours. 3. Remove the secondary antibody and wash with PBST for 3 times, 5 minutes each time. 4. Add diluted DAPI and incubate at room temperature in the dark for 5–10 minutes. 5. Wash with PBST for 3 times, 5 minutes each time. Mounting 1. Mount the sample with an anti-fade mounting medium. 2. Allow the slide to dry at room temperature overnight in the dark. 3. Store the slide in a slide storage box at 4°C, protected from light.

실험 방법

IF

Experimental Protocol:

Sample Preparation

1. Adherent Cells: Place a clean, sterile coverslip in a culture dish. Once the cells grow to near confluence as a monolayer, remove the coverslip for further use.

2. Suspension Cells: Seed the cells onto a clean, sterile slide coated with poly-L-lysine.

3. Frozen Sections: Allow the slide to thaw at room temperature. Wash it with pure water or PBS for 2 times, 3 minutes each time.

4. Paraffin Sections: Deparaffinization and rehydration. Wash the slide with pure water or PBS for 3 times, 3 minutes each time. Then perform antigen retrieval.

Fixation

1. Fix the cell coverslips/spots or tissue sections at room temperature using a fixative such as 4% paraformaldehyde (4% PFA) for 10-15 minutes.

2. Wash the sample with PBS for 3 times, 3 minutes each time.

Permeabilization

1.Add a detergent such as 0.1–0.3% Triton X-100 to the sample and incubate at room temperature for 10–20 minutes.

(Note: This step is only required for intracellular antigens. For antigens expressed on the cell membrane, this step is unnecessary.)

Wash the sample with PBS for 3 times, 3 minutes each time.

Blocking

Add blocking solution and incubate at room temperature for at least 1 hour. (Common blocking solutions include: serum from the same source as the secondary antibody, BSA, or goat serum.)

Note: Ensure the sample remains moist during and after the blocking step to prevent drying, which can lead to high background.

Immunofluorescence Staining (Day 1)

1. Remove the blocking solution and add the diluted primary antibody.

2. Incubate the sample in a humidified chamber at 4°C overnight.

Immunofluorescence Staining (Day 2)

1. Remove the primary antibody and wash with PBST for 3 times, 5 minutes each time.

2. Add the diluted fluorescent secondary antibody and incubate in the dark at 4°C for 1–2 hours.

3. Remove the secondary antibody and wash with PBST for 3 times, 5 minutes each time.

4. Add diluted DAPI and incubate at room temperature in the dark for 5–10 minutes.

5. Wash with PBST for 3 times, 5 minutes each time.

Mounting

1. Mount the sample with an anti-fade mounting medium.

2. Allow the slide to dry at room temperature overnight in the dark.

3. Store the slide in a slide storage box at 4°C, protected from light.

참조

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23372159/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/30066669/

E.coli LPS Antibody [M15H2]

생물학적 설명

사용 정보

참조

적용 데이터