EPZ004777

카탈로그 번호S7353 배치:S735301

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기술 자료

화학식

C28H41N7O4
분자량 539.67 CAS 번호 1338466-77-5
용해도 (25°C)* 시험관 내(In vitro) DMSO 100 mg/mL (185.29 mM)
Ethanol 100 mg/mL (185.29 mM)
Water Insoluble
생체 내(In Vivo) (개별적으로 순서대로 용매를 제품에 첨가하십시오.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml은 약간 용해되거나 불용해됨을 의미합니다.
* Selleck은 모든 화합물의 용해도를 자체적으로 테스트하며, 실제 용해도는 게시된 값과 약간 다를 수 있습니다. 이는 정상적인 현상이며, 약간의 배치 간 변동으로 인해 발생합니다.
* 실온 배송 (안정성 테스트 결과 이 제품은 냉각 조치 없이 배송될 수 있음을 보여줍니다.)

원액 준비

생물학적 활성

설명 EPZ004777은 세포 비증식성 분석에서 IC50이 0.4 nM인 강력하고 선택적인 DOT1L 억제제이며, 다른 모든 시험된 PMT에 비해 DOT1L에 대한 선택성이 1,200배 이상 높습니다. EPZ004777은 apoptosis를 유도합니다.
표적
DOT1L
(Cell-free assay)
0.4 nM
시험관 내(In vitro) EPZ004777은 세포 H3K79 메틸화를 선택적으로 억제하고 주요 MLL 융합 표적 유전자의 발현을 억제합니다. DOT1L 억제 후, 이 화합물은 MLL-Rearranged 세포주와 MLL-AF9 형질전환된 생쥐 조혈모세포의 증식을 선택적으로 억제합니다. 또한, MLL-rearranged 세포에서 분화 및 apoptosis를 유도합니다. 이 화학 물질은 MLL–AF10 및 CALM–AF10 형질전환된 생쥐 골수 세포의 증식을 선택적으로 억제합니다. 이 약물에 의한 DOT1L 억제는 MLL-AF6 형질전환된 세포의 증식 감소, MLL-AF6 표적 유전자 발현 감소, 세포 주기 정지를 초래합니다.
생체 내(In Vivo) EPZ004777은 강력한 항종양 효능을 나타내며 MLL 백혈병 생쥐 이종이식 모델에서 중간 생존율을 유의하게 증가시킵니다.

프로토콜 (참조)

키나아제 분석:

[1]
  • 억제제 IC50 값 결정

    EPZ004777은 1mM에서 시작하여 총 10가지 농도로 DMSO에 3배 연속 희석됩니다. 각 억제제 희석액 1μL 분취량은 384웰 미세역가 플레이트에 분주됩니다. 100% 억제 대조군은 최종 농도 2.5mM의 제품 억제제 S-아데노실-L-호모시스테인(SAH)으로 구성되었습니다. 이 화합물은 분석 버퍼(20mM TRIS [pH 8.0] 10mM NaCl, 0.002% Tween 20, 0.005% 소 피부 젤라틴, 100mM KCl, 및 0.5mM DTT)에 0.25nM DOT1L(1-416) 웰당 40ml와 함께 30분 동안 배양됩니다. 200nM 3H-SAM (American Radiolabeled Chemicals: 80 Ci/mmol), 600nM 비표지 SAM, 및 20nM 뉴클레오솜을 포함하는 분석 버퍼로 구성된 기질 혼합물 웰당 10ml가 반응을 시작하기 위해 첨가됩니다 (두 기질 모두 최종 반응 혼합물에 각각의 KM 값으로 존재합니다). 반응은 120분 동안 배양되고 800mM SAM 웰당 10ml로 퀀칭됩니다. 뉴클레오솜 기질로의 방사능 통합은 플래시플레이트에서 측정됩니다. Histone Methyltransferase 패널의 효소에 대한 IC50 값은 SAM 및 단백질/펩타이드 기질이 각각의 KM 값과 동일한 농도로 존재하는 유사한 균형 분석 조건에서 결정됩니다.
세포 분석:

[1]
  • 세포주

    Human leukemia cell lines MV4-11, THP-1, RS4;11, Kasumi-1, HL-60, REH, and Jurkat. SEM, KOPN-8, 697, U937 and MOLM-13 cells.

  • 농도

    ~50 μM

  • 배양 시간

    14-18 days

  • 방법

    For assessment of cell proliferation and viability in human cell lines, exponentially growing cells are plated, in triplicate, in 96-well plates in a final volume of 150 ml. Cells are incubated in the presence of 3 μM (proliferation curve), or increasing concentrations (IC50 determination) of EPZ004777 up to 50 μM. Viable cell number is determined every 3–4 days for up to 18 days using the Guava Viacount assay and analyzed on a Guava EasyCyte Plus instrument according to the manufacturer’s protocol. On days of cell counts, growth media and this compound are replaced and cells split back to a density of 5×104 cells/well. Total cell number is expressed as split-adjusted viable cells per well. For each cell line, IC50 values are determined from concentration-dependence curves at each time point using Graphpad Prism software. Experiments to determine IC50 values continues until IC50 values stabilized (day 18 for THP-1 cells, day 14 for all other cell lines). For assessment of the effect of this compound treatment on transformed murine hematopoietic progenitors, cells from two independent transductions for each virus are plated in 24-well plates at a density of 0.5–1×105 cell/well in 1 ml media in 24-well plates and exposed to increasing concentrations of this chemical up to 30 mM. Cells are counted and replated at equal cell numbers in fresh media with fresh compound every 3–4 days. For MTT assays, cells from serial replatings are harvested on day 10 and plated, in triplicate at 2×104 cells/well in 100 ml media with the appropriate concentration of this compound. Cells are incubated for 2.5 days, the exposed to 10 ml MTT reagent for 3 hr, and lysed over night in 100 ml MTT- solubilization buffer (both from Cell Proliferation Kit I [MTT]).
동물 연구:

[1]
  • 동물 모델

    A mouse xenograft MV4-11 model of MLL.

  • 용량

    Mini-pumps containing 100 and 150 mg/mL EPZ004777 solutions

  • 투여

    Osmotic pump

참조

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21741596/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23138183/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23361907/

고객 제품 검증

<p>THP-1 cells were treated with MI-3 (6.25 μM, 6 days), GSK126 (5 μM, 6 days), or EPZ004777 (5 μM, 6 days), with orwithout PMA (50 ng/mL, 12 h), and surface expression of CD11b was determined by flow cytometric analysis. The data are representedas the mean ± SD, n = 3. THP-1 cells were collected for Wright-Giemsa staining.</p>

, , FEBS J, 2017, 284(9):1309-1323

Sellecks EPZ004777 인용됨 32 출판물

Transplantation of derivative retinal organoids from chemically induced pluripotent stem cells restored visual function [ NPJ Regen Med, 2024, 9(1):42] PubMed: 39730340
Histone H3K79 methylation by DOT1L promotes Aurora B localization at centromeres in mitosis [ Cell Rep, 2023, 42(8):112885] PubMed: 37494186
Transcriptome-based chemical screens identify CDK8 as a common barrier in multiple cell reprogramming systems [ Cell Rep, 2023, 42(6):112566] PubMed: 37235474
Nuclear Translocation of LDHA Promotes the Catabolism of BCAAs to Sustain GBM Cell Proliferation through the TxN Antioxidant Pathway [ Int J Mol Sci, 2023, 24(11)9365] PubMed: 37298317
Genome-wide DNA methylation changes upon DOT1L inhibition in hormone-responsive breast cancer cells [ Front Cell Dev Biol, 2023, 11:1308025.] PubMed: 38099289
Derivation of totipotent-like stem cells with blastocyst-like structure forming potential [ Cell Res, 2022, 10.1038/s41422-022-00668-0] PubMed: 35508506
Combinatorial targeting of a chromatin complex comprising Dot1L, menin and the tyrosine kinase BAZ1B reveals a new therapeutic vulnerability of endocrine therapy-resistant breast cancer [ Breast Cancer Res, 2022, 24(1):52] PubMed: 35850772
3-deazaadenosine (3DA) alleviates senescence to promote cellular fitness and cell therapy efficiency in mice [ Nat Aging, 2022, 2:851-866] PubMed: 36438588
Role of Dot1L and H3K79 methylation in regulating somatic hypermutation of immunoglobulin genes [ Proc Natl Acad Sci U S A, 2021, 118(29)e2104013118] PubMed: 34253616
Permissive epigenomes endow reprogramming competence to transcriptional regulators [ Nat Chem Biol, 2020, 10.1038/s41589-020-0618-6] PubMed: 32807969

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