Entospletinib (GS-9973)

Entospletinib (GS-9973)은 시험관 내 Caco-2 세포 단층을 가로질러 양방향 투과성이 우수합니다. 세포 내에서는 Syk에 대한 우수한 선택성을 보이며, BCR 매개 B세포 활성화 및 증식뿐만 아니라 면역 복합체 자극 단핵구 사이토카인 생성을 강력하게 억제합니다. [1] 이 화합물의 조합은 CLL 세포 생존력을 시너지적으로 억제하고 케모카인 신호 전달을 더욱 방해합니다. [2]

Entospletinib (GS-9973) (1 mg/kg p.o.)은 쥐와 개에서 중간에서 높은 생체 이용률을 보입니다. 쥐 콜라겐 유도 관절염 모델에서 (1-10 mg/kg p.o.) 발목 염증을 유의하게 억제합니다. 더욱이, 이 화합물은 판누스 형성 억제, 연골 손상, 뼈 흡수, 골막 주위 뼈 형성 등 여러 조직학적 측정에서 질병 조절 활동을 보였으며, ED50은 1.2에서 3.9 mg/kg 범위였습니다. [1]

• 키나아제 분석

  전장 바큘로바이러스 발현 Syk 키나아제 활성은 최종 부피 25 μL에 25 mM Tris–HCl, pH 7.5, 5 mM β-글리세로포스페이트, 2 mM DTT, 0.1 mM Na₃VO₄, 10 mM MgCl₂, 0.5 μM Promega PTK 바이오틴화 펩타이드 기질 1, 0.01% 카제인, 0.01% Triton X-100, 그리고 40 mM ATP (ATP에 대한 Km)를 포함하는 Lance 기반 분석 형식으로 측정되며, 실온에서 60분 동안 배양됩니다. 반응은 30 μL의 SA-APC와 4 nM의 PT-66 항체를 포함하는 30 mM EDTA를 첨가하여 중단되며, 플레이트는 Perkin-Elmer Envision에서 측정됩니다. Entospletinib (GS-9973)에 대한 IC50 값은 4-파라미터 선형 회귀 알고리즘을 사용하여 결정됩니다.

• 세포주

  MV-4-11 cells

• 농도

  ~10 μM

• 배양 시간

  72 hours

• 방법

  Functional impact on cellular Flt3 activity is determined by measuring the inhibition of MV-4-11 cell proliferation by Entospletinib (GS-9973). A total of 104 cells are diluted in RPMI medium containing 10% FBS in 96-well flat-bottomed tissue culture plates and incubated with compound dilutions for 72 h at 37 癈. Alamar blue (10%) is added to the cells, which were incubated for an additional 12-18 h at 37 癈, and inhibition of the relative cell numbers is determined by spectrophotometer readings at 570/600 nm.

• 동물 모델

  Rat Collagen-Induced Arthritis (CIA) Model

• 용량

  ~10 mg/kg bid

• 투여

  p.o.