GSK-J4 Hydrochloride

카탈로그 번호S7070 배치:S707006

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기술 자료

화학식

C24H27N5O2.HCl
분자량 453.96 CAS 번호 1797983-09-5
용해도 (25°C)* 시험관 내(In vitro) DMSO 91 mg/mL (200.45 mM)
Ethanol 91 mg/mL (200.45 mM)
Water 9.4 mg/mL (20.7 mM)
생체 내(In Vivo) (개별적으로 순서대로 용매를 제품에 첨가하십시오.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution
5%DMSO 20%PEG300 5%Tween80 70%ddH2O

Selleck 연구소에서 검증했습니다. 이 제형에 대한 조정이 필요한 경우 맞춤형 테스트를 위해 당사 영업팀에 문의하십시오.

 1.000mg/ml (2.20mM) Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL 20 mg/ml clarified DMSO stock solution to 200 μL PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL Tween80 to the above system, mix evenly to clarify it; then continue to add 700 μL ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results. 
* <1 mg/ml은 약간 용해되거나 불용해됨을 의미합니다.
* Selleck은 모든 화합물의 용해도를 자체적으로 테스트하며, 실제 용해도는 게시된 값과 약간 다를 수 있습니다. 이는 정상적인 현상이며, 약간의 배치 간 변동으로 인해 발생합니다.
* 실온 배송 (안정성 테스트 결과 이 제품은 냉각 조치 없이 배송될 수 있음을 보여줍니다.)

원액 준비

생물학적 활성

설명 GSK-J4 Hydrochloride는 GSK-J1의 세포 투과성 프로드러그로, 세포가 없는 분석에서 60 nM의 IC50으로 H3K27 Histone Demethylase인 JMJD3 및 UTX를 선택적으로 억제하는 최초의 저해제이며, JMJD 패밀리의 다른 demethylase 패널에는 활성을 나타내지 않습니다.
표적
JMJD3
(Cell-free assay)
60 nM
시험관 내(In vitro)

GSK J4 HCl is an ethyl ester derivative of the JMJD3 selective histone demethylase inhibitor GSK-J1 with an IC50 value greater than 50 μM in vitro. This compound is used to probe the consequences of demethylation of H3K27me3. In human primary macrophages, this chemical inhibits the lipopolysaccharide-induced production of cytokines, including pro-inflammatory tumour necrosis factor (TNF). In addition, it prevents the lipopolysaccharide-induced loss of H3K27me3 associated with the TNF transcription start sites and blocked the recruitment of RNA polymerase II.

생체 내(In Vivo)

GSK-J4 hydrochloride is a potent dual inhibitor of H3K27me3/me2-demethylases JMJD3/KDM6B and UTX/KDM6A. It inhibits LPS-induced TNF-α production in human primary macrophages. This compound is a cell permeable prodrug of GSK-J1.

프로토콜 (참조)

키나아제 분석:

[1]
  • Histone Demethylase AlphaScreen

    Histone Demethylase 억제는 Histone Demethylase AlphaScreen 분석법(Amplified Luminescence Proximity Homogenous Assay)을 사용하여 평가합니다. 이 분석법은 비오틴화된 펩타이드 기질을 사용하며, 단백질-A 수용체 비드(protein-A acceptor beads)에 결합된 특정 항체와 펩타이드를 포획하는 Steptavidin 공여자 비드(Steptavidin donor bead)를 사용하여 생성된 메틸 마크 산물을 검출하는 원리에 의존합니다. 간단히 말해, 재조합 Histone Demethylase 효소는 FAS(Ferrous Ammonium Sulphate) 형태의 Fe2+, -ketoglutarate(KG) 및 비오틴화된 펩타이드 기질의 존재 하에서 배양됩니다. 환원 환경을 제공하고 Fe2+의 산화를 방지하기 위해 L-Ascorbic Acid가 포함됩니다. 펩타이드 기질과 배양한 후, AlphaScreen 기술을 사용하여 생성물의 존재를 검출합니다. Histone Demethylase AlphaScreen 분석은 흰색 proxiplate를 사용하여 384-well 플레이트 형식으로 수행됩니다. 모든 단계는 분석 버퍼(50 mM HEPES pH 7.5, 0.1% (w/v) BSA 및 0.01% (v/v) Tween-20)에서 수행됩니다. FAS는 매일 20 mM HCl에 400 mM 농도로 새로 녹인 후 탈이온수로 1.0 mM로 희석합니다. 다른 모든 구성 요소는 매일 탈이온수에 새로 녹여 사용합니다. IC50 측정을 위해 Histone Demethylase 효소가 포함된 분석 버퍼 5 μL를 384-well proxiplate의 웰에 옮깁니다. 이 화합물의 적정액(0.1 μL)을 각 웰에 옮기고 효소가 이 화학 물질과 15분 동안 사전 배양되도록 합니다(DMSO 최종 농도는 1%). 효소 반응은 α-KG, FAS, L-Ascorbic Acid 및 비오틴화된 펩타이드 기질로 구성된 기질 혼합물 5 μL를 첨가하여 시작하며, 반응은 표시된 시간 동안 실온에서 배양합니다. 효소 반응은 표시된 시간이 지난 후 EDTA(분석 버퍼 내 최종 농도 7.5 mM) 5 μL를 첨가하여 중단시킵니다. Streptavidin Donor 비드(0.08 mg/ml)와 Protein-A 결합 수용체 비드(0.08 mg/ml)를 메틸 마크 산물에 대한 항체와 함께 1시간 동안 사전 배양하고, 사전 배양된 AlphaScreen 비드 5 μL(수용체 및 공여자 비드 기준 최종 농도 0.02 mg/ml)를 첨가하여 biotin-H3-product의 존재를 검출합니다. 검출은 실온에서 1시간 동안 진행하며, 분석 플레이트는 BMG Labtech Pherastar FS 플레이트 리더에서 읽습니다. 데이터는 효소가 없는 대조군으로 정규화하며, IC50은 GraphPad Prism 5를 사용한 비선형 회귀 곡선 적합법으로 결정합니다.
세포 분석:

[2]
  • 세포주

    Mouse podocytes

  • 농도

    5 μM

  • 배양 시간

    48 h

  • 방법

    Cells were serum starved for 4 hours, followed by treatment with EPZ-6438 (10 μM) or this compound (5 μM) for 48 hours.
동물 연구:

[2]
  • 동물 모델

    BALB/c mice

  • 용량

    10 mg/kg

  • 투여

    i.p.

참조

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22842901/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/29227285/

고객 제품 검증

<p>DIPG cells were seeded into 96-well plates and treated with panobinostat and GSK-J4 individually or in combination at the indicated concentrations for 72 hr in at least triplicate. Cell viabilities were then assessed using the CelltiterGlo assay relative to 0.1% DMSO control. Data shown as mean ± SD. *indicates the two drugs demonstrate synergy at that condition (i.e. CI < 1).</p>

, , Nat Med, 2015, 21(6):555-9.

<p>GSK-J4 impaired hair cell regeneration after neomycin damage. (A–D) GSK-J4 reduced the numbers of GFP-positive (green) and FM1-43FX-positive (red) hair cells compared with DMSO-treated controls. Scale bars = 10 μm. (E,F) Quantitative analysis of the number of GFP-positive (E) or FM1-43FX-positive (F) hair cells per neuromast (NM) at different time points in DMSO-treated control and GSK-J4-treated larvae. In the 24-h group, n = 40 neuromasts (20 larvae) per group; in the 48-h group, n = 28 neuromasts (14 larvae) per group. ***p < 0.0001. Bars are mean ± sem. [24-h group: One-way ANOVA; GFP-positive cells: F(2, 117) = 96.94; FM1-43FX-positive cells: F(2, 117) = 114. 48-h group: One-way ANOVA; GFP-positive cells: F(2, 81) = 88.96; FM1-43FX-positive cells: F(2, 81) = 93.85].</p>

, , Front Mol Neurosci, 2017, doi: 10.3389/fnmol.2017.00051

Inhibition of JMJD3 mitigated the IL-1β-induced inflammatory response in the MH7A cells. The MH7A cells were transfected with control or JMJD3 siRNA or treated with the indicated concentrations of GSK-J4 (JMJD3 inhibitor) and were then stimulated with IL-1β for 24 h. Western blot analysis of JMJD3, TLR2, COX-2 and GAPDH expression (d).

데이터 출처 [ , , Cell Mol Immunol, 2018, doi:10.1038/s41423-018-0037-8 ]

GSK J4 inhibited PDGF-induced cyclin D1 and PCNA expression. The cells were preincubated for 4 h, with or without 10 mM GSK J4, followed by stimulation with 25 ng/ml PDGF-BB for 36 h. Cells were immunostained with anti-JMJD3 antibodies (green), and nuclei were stained with DAPI (blue) and analyzed by fluorescence microscopy.

데이터 출처 [ , , FASEB J, 2018, 32(7):4031-4042 ]

Selleck's GSK-J4 Hydrochloride 인용됨 66 출판물

HIF-independent oxygen sensing via KDM6A regulates ferroptosis [ Mol Cell, 2025, 85(15):2973-2987.e6] PubMed: 40712585
Loss of Kmt2c or Kmt2d drives brain metastasis via KDM6A-dependent upregulation of MMP3 [ Nat Cell Biol, 2024, 26(7):1165-1175] PubMed: 38926506
Evi1 governs Kdm6b-mediated histone demethylation to regulate the Laptm4b-driven mTOR pathway in hematopoietic progenitor cells [ J Clin Invest, 2024, 134(24)e173403] PubMed: 39680456
Targeting lysine demethylase 6B ameliorates ASXL1 truncation-mediated myeloid malignancies in preclinical models [ J Clin Invest, 2024, 134(1)e163964] PubMed: 37917239
Refractory testicular germ cell tumors are highly sensitive to the targeting of polycomb pathway demethylases KDM6A and KDM6B [ Cell Commun Signal, 2024, 22(1):528] PubMed: 39482699
Dual targeting of histone deacetylases and MYC as potential treatment strategy for H3-K27M pediatric gliomas [ Elife, 2024, 13RP96257] PubMed: 39093942
Prenatal dexamethasone exposure reduces osteoprogenitor proliferation in mice via histone modifications at the Mkp-1 gene locus [ Commun Biol, 2024, 7(1):1589] PubMed: 39609620
Targeting histone demethylases JMJD3 and UTX: selenium as a potential therapeutic agent for cervical cancer [ Clin Epigenetics, 2024, 16(1):51] PubMed: 38576048
miRNA-27a-3p is involved in the plasticity of differentiated hepatocytes [ Gene, 2024, 913:148387] PubMed: 38499211
Refractory testicular germ cell tumors are highly sensitive to the targeting of polycomb pathway demethylases KDM6A and KDM6B [ Res Sq, 2024, rs.3.rs-4986186] PubMed: 39483904

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