GSK2606414

이 화합물은 A459 세포에서 PERK 자가인산화를 IC50 <0.3 μM으로 억제합니다. [1]

GSK2606414는 마우스, 랫트 및 개에서 높은 경구 생체 이용률과 낮거나 중간 정도의 혈액 청소율을 보입니다. 이 화합물은 경구 투여 시 췌장 인간 BxPC3 종양을 가진 마우스에서 용량 의존적으로 종양 성장을 억제합니다. [1]

• PKR 유사 소포체 키나아제 (PERK) 분석 (HTRF 형식)

  GST-PERK 세포질 도메인을 구매합니다. 6-His-전장 인간 eIF2α는 Sf9 곤충 세포에서 바큘로바이러스 발현으로부터 정제됩니다. eIF2α 단백질은 투석을 통해 PBS로 버퍼 교환되고, NHS-LC-비오틴으로 화학적으로 변형된 후 투석을 통해 50 mM Tris, pH 7.2, 250 mM NaCl, 5 mM DTT로 버퍼 교환됩니다. 단백질은 분주되어 -80 °C에 보관됩니다. 퀀칭 용액은 신선하게 준비되며, 반응에 첨가될 때 최종 농도가 4 nM eIF2α 인산화 세린51 항체, 4 nM Eu-1024 표지된 항-토끼 IgG, 40 nM 스트렙타비딘 Surelight APC, 15 mM EDTA가 됩니다. 반응은 검은색 384웰 폴리스티렌 저용량 플레이트에서 최종 부피 10 μL로 수행되었습니다. 반응 부피는 최종 농도로 10 mM HEPES, 5 mM MgCl₂, 5 μM ATP, 1 mM DTT, 2 mM CHAPS, 40 nM 비오틴화된 6-His-eIF2α, 0.4 nM GST-PERK를 포함합니다. 분석 대상 화합물은 DMSO에 1.0 mM로 용해되고 11가지 희석을 통해 DMSO로 1-3으로 연속 희석됩니다. 각 농도 0.1 μL를 분석 플레이트의 해당 웰로 옮깁니다. 이는 최종 화합물 농도 범위를 0.00017에서 10 μM로 만듭니다. GST-PERK 용액은 화합물이 포함된 분석 플레이트에 첨가되고 실온에서 30분 동안 전배양됩니다. 반응은 ATP 및 eIF2α 기질 용액의 첨가로 시작됩니다. 1시간 배양 후 퀀칭 용액이 첨가됩니다. 신호 결정을 위해 플레이트는 실온에서 2시간 동안 덮어둡니다. 결과 신호는 Viewlux 리더에서 정량화됩니다. APC 신호는 APC/Eu 계산을 통해 데이터를 변환하여 유로퓸 신호에 정규화됩니다. 농도 반응 곡선에 대한 데이터는 데이터 감소 공식 100 × [1 – (U1 – C2)/(C1 – C2)]로 계산된 % 억제율 대 화합물 농도로 플로팅되며, 여기서 U는 알 수 없는 값, C1은 1% DMSO에 대해 얻은 평균 대조군 값, C2는 0.1 M EDTA에 대해 얻은 평균 대조군 값입니다. 데이터는 A가 최소 반응, B가 최대 반응, D가 기울기 인자, x가 화합물 농도, C가 IC50인 에 의해 설명되는 곡선으로 피팅됩니다. 각 화합물에 대한 결과는 IC50 값으로 기록됩니다.

• 세포주

  A549 cells

• 농도

  0.3 μM

• 배양 시간

  2 h

• 방법

  Cells were incubated with PERK inhibitor (GSK2606414, compound 38) and then stimulated with thapsigargin. After 2 h, the cells were lysed and analyzed for inhibition of PERK autophosphorylation.

• 동물 모델

  BxPC3 human pancreatic xenograft model

• 용량

  ~150 mg/kg

• 투여

  Oral administration