GSK343

GSK343은 HCC1806 유방암 세포에서 174 nM의 IC50으로 H3K27 (H3K27me3)의 삼메틸화를 억제합니다. 이 화합물은 유방암 세포와 전립선암 세포에서 세포 증식을 강력하게 억제하며, 전립선암 세포주 LNCaP가 2.9 μM의 IC50으로 가장 민감합니다. [1]

이 화학 물질은 생체 내 종양 미세 환경을 모방하는 3D 마트리젤 세포외 기질(ECM)에서 배양된 EOC 세포의 성장을 현저히 억제합니다. 또한, 3D에서 EOC 세포의 세포자멸사를 유도하고 EOC 세포의 침입을 현저히 억제합니다. [2]

GSK343, 선택적 EZH2 억제제는 식균 작용을 억제합니다.

• Histone Methyltransferase에 대한 시험관 내 생화학 분석

  EZH2에 대한 활성은 5개 구성원 PRC2 복합체(Flag-EZH2, EED, SUZ12, AEBP2, RbAp48)를 사용하여 평가됩니다. 분석 프로토콜은 다음과 같이 요약될 수 있습니다. 고체에서 100% DMSO에 10 mM 농도의 화합물 원액을 준비합니다. 384웰 형식으로 11점 계열 희석 마스터 플레이트를 준비하고(1:3 희석, 6번 및 18번 열은 동일 부피의 DMSO 대조군) 음향 분주 기술을 사용하여 분석 준비 플레이트에 분주하여 100 nL의 화합물 및 DMSO 대조군 스탬프를 생성합니다. 분석 첨가는 10 nM EZH2 및 기질 용액(5 Tµg/mL HeLa 뉴클레오솜 및 0.25 TµM [³H]-SAM)을 동일 부피로 첨가하고 멀티 드롭 콤비 분주기를 사용하여 분석 플레이트에 분주하는 것으로 구성되었습니다. 반응 플레이트는 1시간 동안 배양하고 0.1 mM 비표지 SAM을 포함하는 0.5 mg/mL PS-PEI 이미징 비드(RPNQ0098)를 동일 부피로 첨가하여 퀀칭합니다. 플레이트는 밀봉하고 30분 동안 암적응시킨 후 Viewlux 이미저를 사용하여 5분 종점 발광 이미지를 얻습니다. Z’ 및 신호 대 배경과 같은 플레이트 통계 및 용량 반응 곡선은 Activity BaseXE를 사용하여 분석됩니다. EZH1의 시험관 내 생화학적 활성은 EZH2와 동일한 384웰 SPA 분석을 사용하여 5개 구성원 PRC2 복합체의 일부로 평가됩니다. 완충액 성분, 시약 분주, 화합물 플레이트 준비, 퀀칭 조건 및 데이터 분석은 EZH1과 EZH2에 대해 동일하며 최종 분석 농도는 20 nM EZH1, 5 TµM/mL HeLa 뉴클레오솜 및 0.25 TµM [³H]-SAM입니다. 추가 데이터 분석, pIC50 피벗 및 시각화는 TIBCO Spotfire를 통해 가능합니다. 이 화합물은 Reaction Biology Corp. (Malvern, PA)에서 Histone Methyltransferase 분석 패널의 억제 정도를 평가하기 위해 프로파일링됩니다. Methyltransferase 활성은 소형 방사성 동위원소 기반 필터 결합 분석인 HotSpot 기술을 사용하여 평가됩니다. 억제제는 디메틸술폭시드(DMSO)에 용해되어 최대 100 uM의 농도에서 테스트되며 최종 DMSO 농도는 2%입니다. 제시된 농도의 메틸트랜스퍼라제와 첨부 표에 표시된 선호 기질을 포함하는 완충액은 이 화학 물질과 10분 동안 사전 배양됩니다. 반응은 1 uM S-아데노실-L-[메틸-³H]메티오닌(SAM) 첨가로 시작되며, 30°C에서 60분 동안 배양한 다음 P81 필터 페이퍼로 옮겨 PBS로 세척한 후 검출됩니다.

• 세포주

  Breast cancer cell lines (HCC1806, Sk-Br-3, ZR-75-1), prostate cancer cell lines (DU145, PC3, LNCaP)

• 농도

  ~50 μM

• 배양 시간

  6 days

• 방법

  To account for varying doubling rates among cancer cell lines, the optimal cell seeding is determined empirically for all cell lines by examining their growth in a 384-well plate over 6 days with a wide range of seeding densities. Cells are then plated at the optimal seeding density and allowed to adhere overnight. Cells are treated in duplicate with a 20-point 2-fold dilution series of this compound or 0.147% DMSO (vehicle control) and incubated for 6 days at 37C in 5% CO2. Cells are then lysed with 25 μl CellTiter-Glo per well and chemiluminescence is quantified with a TECAN Safire2 microplate reader. In addition, an untreated plate of cells is harvested at the time of compound addition (T0) to quantify the starting number of cells. CTG values after 6 days of treatment were expressed as a percent of the T0 value and plotted against compound concentration. Data are fit with a 4-parameter equation to generate a concentration response curve and the concentration of compound required to inhibit 50% of growth (gIC50) is determined