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생물학적 설명
| 특이성 | Human Dectin-1/CLEC7A Antibody [J4K7]는 총 Dectin-1/CLEC7A 단백질의 내인성 수준을 검출합니다. |
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| 배경 | 인간 덱틴-1 (CLEC7A)은 단핵구, 대식세포, 수지상 세포 및 호중구를 포함한 골수 세포에 주로 발현되는 제2형 막관통 C형 렉틴 수용체(CLR)이며, 선천 면역에서 곰팡이 β-글루칸에 대한 주요 패턴 인식 수용체 역할을 합니다. 짧은 이소형에서는 줄기가 없는 단일 세포외 탄수화물 인식 도메인(CRD)으로 구성되어 있으며, W221, N242 및 E248 잔기에 의해 형성되는 얕고 용매에 노출된 결합 홈을 가지고 있어 효모 및 미코박테리아 세포벽에서 유래한 β-1,3/β-1,6-글루칸 폴리머를 Ca²⁺ 비의존적, 렉틴 유사 상호작용을 통해 수용하며, 이는 소수성 스태킹 및 수소 결합에 의해 지지됩니다. 이 수용체는 고전적인 ITAM 또는 ITIM 모티프 대신 비전형적인 hemITAM 모티프(E²YSEI)를 지닌 단일 막관통 나선과 짧은 세포질 꼬리를 포함합니다. 리간드 결합 시, 덱틴-1은 콜레스테롤이 풍부한 막 나노도메인 내에서 클러스터를 형성하여 Src 계열 키나아제(SFK)의 모집을 가능하게 하여 hemITAM 티로신을 인산화하고, 이는 다시 이중 SH2 도메인을 통해 Syk 키나아제를 모집합니다. 이로 인해 CARD9/Bcl10/MALT1 복합체의 도킹 및 후속적인 NF-κB p65 활성화가 일어나 IL-12, IL-23, IL-6 및 TNF-α와 같은 전염증성 사이토카인의 생산을 유도합니다. TLR2와의 공동 국소화는 MAPK 신호 전달(p38, ERK, JNK) 및 NOX2를 통한 반응성 산소종(ROS) 생성을 시너지 효과적으로 향상시킵니다. 줄기 영역을 포함하는 더 긴 덱틴-1 이소형은 CRD 다가성 및 효과적인 곰팡이 포식 작용을 촉진함으로써 지모산 식세포 작용을 가능하게 합니다. 이 Syk–CARD9–NF-κB 신호 전달 축은 칸디다 및 아스페르길루스와 같은 병원체에 대한 Th17 매개 면역을 조율하는 반면, 줄기 영역의 O-당화(T105 시알릴-코어1)는 역설적으로 혈소판 CLEC-2에 대한 대항 리간드 역할을 하여 감염 중 혈전증을 억제합니다. |
사용 정보
| 응용 | IF, FCM | 희석 |
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| 반응성 | Human | ||||||
| 출처 | Mouse Monoclonal Antibody | MW | |||||
| 보관 완충액 | PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 | 보관 (수령일로부터) |
-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years | ||||
| IF |
Experimental Protocol:
Sample Preparation
1. Adherent Cells: Place a clean, sterile coverslip in a culture dish. Once the cells grow to near confluence as a monolayer, remove the coverslip for further use.
2. Suspension Cells: Seed the cells onto a clean, sterile slide coated with poly-L-lysine.
3. Frozen Sections: Allow the slide to thaw at room temperature. Wash it with pure water or PBS for 2 times, 3 minutes each time.
4. Paraffin Sections: Deparaffinization and rehydration. Wash the slide with pure water or PBS for 3 times, 3 minutes each time. Then perform antigen retrieval.
Fixation
1. Fix the cell coverslips/spots or tissue sections at room temperature using a fixative such as 4% paraformaldehyde (4% PFA) for 10-15 minutes.
2. Wash the sample with PBS for 3 times, 3 minutes each time.
Permeabilization
1.Add a detergent such as 0.1–0.3% Triton X-100 to the sample and incubate at room temperature for 10–20 minutes.
(Note: This step is only required for intracellular antigens. For antigens expressed on the cell membrane, this step is unnecessary.)
Wash the sample with PBS for 3 times, 3 minutes each time.
Blocking
Add blocking solution and incubate at room temperature for at least 1 hour. (Common blocking solutions include: serum from the same source as the secondary antibody, BSA, or goat serum.)
Note: Ensure the sample remains moist during and after the blocking step to prevent drying, which can lead to high background.
Immunofluorescence Staining (Day 1)
1. Remove the blocking solution and add the diluted primary antibody.
2. Incubate the sample in a humidified chamber at 4°C overnight.
Immunofluorescence Staining (Day 2)
1. Remove the primary antibody and wash with PBST for 3 times, 5 minutes each time.
2. Add the diluted fluorescent secondary antibody and incubate in the dark at 4°C for 1–2 hours.
3. Remove the secondary antibody and wash with PBST for 3 times, 5 minutes each time.
4. Add diluted DAPI and incubate at room temperature in the dark for 5–10 minutes.
5. Wash with PBST for 3 times, 5 minutes each time.
Mounting
1. Mount the sample with an anti-fade mounting medium.
2. Allow the slide to dry at room temperature overnight in the dark.
3. Store the slide in a slide storage box at 4°C, protected from light.
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참조
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