IOX1

IOX1은 KDM4A 억제를 통해 HeLa 세포에서 H3K9me3 수준을 증가시키지만, 세포 생존력에는 유의미한 영향을 미치지 않습니다. 이 화합물은 낮은 세포 투과성으로 인해 HeLa 세포에서 효능이 낮지만, n-옥틸 에스터 유도체는 세포 투과성을 향상시킵니다. [1]

• AlphaScreen 분석

  모든 시약은 50 mM HEPES, 0.1% BSA, pH 7.5에 0.01% Tween20을 보충하여 희석하고, 플레이트에 첨가하기 전에 실온에서 평형화되도록 합니다. 촉매 회전율 분석은 실온에서 저용량 384웰 플레이트에서 10 μL 부피로 진행됩니다. 반응은 효소(5 nM), 비오틴화된 기질 펩타이드(30 nM), Fe(II) (1 μM), 아스코르브산(100 μM), 2OG (10 μM)으로 구성되었으며 실온에서 진행되었습니다. PHD2의 경우, 반응은 효소(5 nM), 비오틴화된 기질 펩타이드(60 nM), Fe(II) (20 μM), 아스코르브산(200 μM), 2OG (2 μM)으로 구성되었으며 실온에서 진행되었습니다. EDTA는 반응을 quenching하는 데 사용되며 (5 μL), 펩타이드 생성물 항체와 미리 배양된 AlphaScreen 도너(스트렙타비딘 접합) 및 억셉터(단백질 A 접합) 비드(5 μL)가 추가됩니다. 플레이트는 빛으로부터 보호하기 위해 포일로 밀봉하고, 실온에서 60분 동안 배양한 후 AlphaScreen 680 여기/570 방출 필터 세트를 사용하는 PHERAstar FS 플레이트 리더로 판독합니다. 20 μL 반응에서의 최종 비드 농도는 20 μg/mL입니다. IC50 값은 해당 DMSO 대조군에 대한 정규화 후 Prism 6에서 계산됩니다.

• 세포주

  HeLa cells

• 농도

  ~300 μ M

• 배양 시간

  24 hours

• 방법

  Antiproliferative activities of compounds are determined by the MTT assay. HeLa cells are seeded into 96-well plates and cultured at 37 °C for 24 h to achieve 70%. Subsequently, the medium is replaced with DMEM medium containing the tested compounds in different concentrations of 1-300 μM in 1% DMSO. Staurosporine in 0.03-10 μM final concentration is used as a control for cytotoxicity. After 24 h of treatment, the medium is replaced with CellTiter 96 Aqueous One Solution Reagent and incubated for 4 hours. CC50 values are calculated in Prism 6 software after normalisation against corresponding 1% DMSO treated cells and 1% DMSO in media (no cells) controls.