JNK Inhibitor VIII

JNK Inhibitor VIII(TCS-JNK-6a)는 ATP 부위에 경쟁적이고 가역적으로 결합합니다. 이 화합물은 놀라운 선택성 프로파일을 보여줍니다. 또한, HepG2 세포에서 c-Jun 인산화에 대한 일부 억제를 나타냅니다. TCS-JNK-6o는 페닐 고리의 디메톡시 치환을 가진 이 화학 물질의 2,5-디메톡시 유사체입니다. 이 화합물은 효능의 추가적인 향상을 보여줍니다.[1]

JNK Inhibitor VIII(TCS-JNK-6o)의 약동학적 프로파일은 Sprague-Dawley 쥐에서 결정됩니다. 이 화합물은 약 1시간의 짧은 반감기, 빠른 청소율 및 거의 측정할 수 없는 생체 이용률을 보여줍니다. 마이크로솜 배양 연구에 따르면 이 화합물의 산화 대사가 매우 빠릅니다.[1]

• Ser/Thr-키나아제

  Ser/Thr-키나아제 분석은 방사성 FlashPlate 기반 분석 플랫폼을 사용하여 수행됩니다. 이 형식에서 바이오틴화된 기질 펩타이드(2 μM), γ-[³³P]-ATP(5 μM, 2 mCi/μmol), 이 화합물(2% DMSO에 3-10000 nM) 및 효소는 25 mM Hepes, pH 7.5, 1 mM DTT, 10 mM MgCl2, 100 μM Na3VO4 및 0.075 mg/mL Triton X-100을 포함하는 완충액에서 1시간 동안 배양되고, 100 mM EDTA 및 4 M NaCl을 포함하는 80 μL의 정지 완충액으로 정지된 후 스트렙타비딘 코팅된 384웰 FlashPlate로 옮겨져 3회 세척된 후 TopCount 마이크로플레이트 리더를 사용하여 판독됩니다.

• 세포주

  hepG2 cells

• 농도

  Serial concentrations

• 배양 시간

  1 h

• 방법

  HepG2 human hepatoma cells (ATCC) are cultured in low glucose MEM supplemented with 1×NEAA, 1×sodium pyruvate, and 10% FBS. For P-c-Jun assays, cells are plated at 5×10⁴ cells/well in 500 μL of complete media on 24-well collagen-coated plates and incubated overnight. Serial compound dilutions are made in DMSO at 100×, and then 5 μL is added directly to the media on the cells to provide the final inhibitor concentrations. After 1 h, cells are stimulated with vehicle control or TNFR for 30 min and harvested in 70μL of lysis buffer (TBS (54 mM Tris-HCl, pH 7.6, 150 mM NaCl), 1% TritonX-100,0.5% Nonidet P-40, 0.25% sodium deoxycholate, 1 mM EDTA, 1 mM EGTA, 0.5 mM sodium fluoride, 1 mM pervanadate, 1 μM microcystin, 1 mM AEBSF, 1 tablet of complete EDTA Free-Mini inhibitor cocktail) and frozen at -80 °C prior to use in the P-c-Jun assay.

• 동물 모델

  Sprague-Dawley rat

• 용량

  5 mg/kg

• 투여

  IV, Oral gavage