KNK437

COLO 320DM 세포(200,000개)는 열 충격 전 1시간 동안 KNK437 존재하에 배양하기 2일 전에 12웰 플라스틱 플레이트의 각 웰에 주입됩니다. 세포는 42°C에서 90분 동안 열 충격을 받거나 동일한 시간 동안 37°C에 유지한 다음 37°C에서 2시간 동안 배양됩니다. 대사 라벨링을 위해 세포는 Ca2+ 또는 Mg2+가 없는 PBS로 세척되고 10% 투석된 태아 소 혈청으로 보충된 250 μL의 메티오닌이 없는 DMEM에 1.22 MBq의 [³⁵S]메티오닌과 함께 1시간 동안 배양됩니다. 대사 라벨링 후 세포는 PBS로 두 번 세척하고 1% NP40, 0.15 M NaCl, 50 mM Tris-HCl (pH 8.0), 5 mM EDTA, 및 프로테아제 억제제 [0.2 mM 4-(2-아미노에틸)벤젠설포닐 플루오라이드 염산염, 2 mM N-에틸말레이미드, 1 μg/mL 펩스타틴, 및 1 μg/mL 류펩틴]를 포함하는 완충액에서 용해됩니다. 12,000×g에서 20분 동안 원심분리한 후, 동일한 양의 트리클로로아세트산 불용성 방사능을 함유하는 세포 추출물은 2차원 젤 전기영동으로 분석됩니다 (1차원 젤 전기영동은 불균형 pH 구배 젤 전기영동이고, 2차원 젤 전기영동은 10% SDS-PAGE입니다).

COLO 320DM cells

100 μM

1 h

Thermotolerance is induced by incubating cells with 300 μM sodium arsenite for 90 min. Cells are preincubated with or without 100 μM KNK437 for 1 h before the sodium arsenite treatment. After treatment of the cells with sodium arsenite, cells are washed once with PBS and incubated at 37℃ for 5 h with or without this compound. The effects of this chemical on acquired thermotolerance are tested by heating the cells at 45°C for the indicated time. The surviving fraction is calculated as the plating efficiency of the treated cells divided by the plating efficiency of untreated control cells.

C3H/He mice

200 mg/kg

i.p.