Laduviglusib (CHIR-99021) Hydrochloride

CHIR-99021은 가장 가까운 상동체인 CDC2 및 ERK2는 물론 다른 단백질 키나아제에 비해 GSK-3에 대해 500배 이상의 선택성을 보입니다. 또한 CHIR-99021은 22개의 약리학적으로 관련 있는 수용체 패널에 대해 약한 결합만 보였으며, 23개의 비키나아제 효소 패널에 대해서는 억제 활성이 거의 없었습니다. CHIR-99021은 인슐린 수용체 발현 CHO-IR 세포에서 EC50이 0.763 μM인 글리코겐 합성효소(GS)의 활성화를 유도합니다. [1] 인슐린 작용을 모방하는 것 외에도, CHIR-99021 (3 μM)에 의한 GSK-3 억제는 3T3-L1 전지방세포에서 정규 Wnt 신호 전달 경로를 모방하여 유리 세포질 β-카테닌을 1.9배 증가시킵니다. 분화의 첫 3일 중 어느 날이든, CHIR-99021 처리는 CCAAT/enhancer-binding protein α (C/EBPα) 및 peroxisome proliferator-activated receptor γ (PPARγ)의 유도를 차단함으로써 0.3 μM의 IC50으로 전지방세포 분화를 억제합니다. [2] 염화리튬 및 AR-A014418과 달리 CHIR-99021 처리는 고농도에서도 INS-1E 세포의 생존력을 감소시키지 않습니다. 대신, CHIR-99021은 용량 의존적인 방식으로 INS-1E 세포의 증식 속도를 강력하게 증가시키고, 고농도 포도당 및 고농도 팔미트산에 의해 유도된 INS-E 세포 사멸을 농도 의존적인 방식으로 유의하게 억제합니다. CHIR-99021은 1 μM만큼 낮은 농도에서도 분리된 쥐 섬에서 췌장 베타 세포 복제를 촉진하며, 5 μM CHIR-99021 처리 시 세포 복제가 2-3배 증가합니다. [3]

CHIR-99021을 30 mg/kg 경구 투여하면 제2형 당뇨병 설치류 모델에서 포도당 대사를 향상시키며, 투여 3-4시간 후 혈장 포도당이 거의 150 mg/dl 감소하는 최대 효과를 보이고, 혈장 인슐린은 대조군 수준 이하로 유지됩니다. ZDF 쥐에게 경구 포도당 부하 1시간 전에 CHIR-99021을 16 또는 48 mg/kg 경구 투여하면 포도당 내성이 유의하게 개선되며, 혈장 포도당이 16 mg/kg에서 14%, 48 mg/kg에서 33% 감소했습니다. 또한 고용량의 CHIR-99021은 경구 포도당 부하 전에 고혈당증을 감소시켰습니다. [1]

• 무세포 키나아제 분석

  폴리프로필렌 96웰 플레이트에 300 μL/웰 완충액(50 mM 트리스 HCl, 10 mM MgCl₂, 1 mM EGTA, 1 mM 디티오트레이톨, 25 mM β-글리세로포스페이트, 1 mM NaF, 0.01% BSA, pH 7.5)을 채우고, 27 nM GSK-3α 또는 29 nM GSK-3β, 및 0.5 μM 비오틴-CREB 펩타이드 기질을 첨가합니다. 다양한 농도의 CHIR-99021을 3.5 μL DMSO에 첨가한 다음, 50 μL ATP 원액을 첨가하여 모든 무세포 분석에서 최종 ATP 농도를 1 μM로 만듭니다. 배양 후, 100 μL씩 3회 반복하여 100 μL/웰 50 μM ATP 및 20 mM EDTA를 포함하는 Combiplate 8 플레이트로 옮깁니다. 1시간 후, 웰을 PBS로 5회 헹구고, 200 μL의 섬광액을 채우고, 밀봉한 후 30분 동안 방치한 다음 섬광 카운터로 계수합니다. 모든 단계는 실온에서 수행됩니다.

• 세포주

  INS-1E

• 농도

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~ 20 μM

• 배양 시간

  1, or 4 days

• 방법

  Cells are maintained for 24 hours in starvation medium (culture medium with only 5 mM glucose, 1% fetal calf serum). Then cells are exposed to various concentrations of CHIR-99021 for 1, or 4 days. Cell number is measured by staining of cellular DNA with CyQuant dye, which becomes fluorescent when bound to DNA. Fluorescence is measured after 30 minutes of incubation using the FLUOstar Optima reader. Cell replication is determined by BrdUrd incorporation. BrdUrd labeling solution is added to the medium for the last 4 hours before the cells are fixed using FixDenat solution and incubated with monoclonal anti-BrdUrd-POD antibodies. After substrate solution is added to each well, the light emission is measured in a microplate luminometer using the Analyst HT detection system.

• 동물 모델

  Female db/db mice or male ZDF rats with type 2 diabetes

• 용량

  ~48 mg/kg

• 투여

  Orally