E7080 (Lenvatinib)

E7080은 시험관 내 혈관 신생의 강력한 억제제로서 VEGF/KDR 및 SCF/Kit 신호에 유의미한 억제 효과를 보입니다. 시험관 내 수용체 티로신 및 세린/트레오닌 키나아제 분석에 따르면, 이 화합물은 Flt-1, KDR, Flt-4를 각각 22, 4.0 및 5.2 nM의 IC50으로 억제합니다. 이들 키나아제 외에도, 이 화합물은 FGFR1, PDGFRα 및 PDGFRβ에 대해 각각 46, 51 및 100 nM의 IC50 값으로 FGFR1 및 PDGFR Protein Tyrosine Kinase를 억제합니다. [1] 이 화합물은 VEGF 및 VEGF-C에 의해 각각 자극되는 HUVEC에서 VEGFR2 (IC50, 0.83 nM) 및 VEGFR3 (IC50, 0.36 nM)의 인산화를 강력하게 억제합니다. [2] 최근 연구에 따르면 이 화합물 처리 (1 μM 및 10 μM 모두)는 FGFR 및 PDGFR 신호를 억제함으로써 세포 이동 및 침습의 유의미한 억제를 유발합니다. [3]

H146 이종이식 모델에 경구 투여했을 때, Lenvatinib (E7080)은 30 및 100 mg/kg 용량 의존적으로 H146 종양 성장을 억제하고 100 mg/kg에서 종양 퇴행을 유도합니다. 또한, 이 화합물 100 mg/kg은 항-VEGF 항체 및 이마티닙 치료보다 미세혈관 밀도를 더 감소시킵니다. [1] 이 화합물은 RTV (8일째 계산된 종양 부피/1일째 종양 부피)가 0.81인 MDA-MB-231 유선 지방 패드 (m.f.p.) 모델에서 국소 종양 성장을 유의하게 억제하며, 림프절에 확립된 MDA-MB-231 종양 전이성 결절의 혈관 신생 및 림프관 신생을 모두 감소시킵니다. [2]

• 시험관 내 키나아제 분석 [1]

  Protein Tyrosine Kinase 분석은 재조합 수용체 키나아제 도메인을 사용하여 HTRF (KDR, VEGFR1, FGFR1, c-Met, EGFR) 및 ELISA (PDGFRβ)로 수행됩니다. 두 분석 모두에서, 이 화합물의 연속 희석액 4 μL를 96웰 원형 플레이트에 효소 10 μL, 폴리 (GT) 용액 (250 ng) 16 μL, ATP 용액 (1 μM ATP) 10 μL와 혼합합니다 (DMSO의 최종 농도는 0.1%입니다). 공란을 위한 웰에는 효소가 추가되지 않습니다. 대조군 웰에는 시험 물질이 추가되지 않습니다. 키나아제 반응은 각 웰에 ATP 용액을 추가하여 시작됩니다. 30°C에서 30분 배양 후, 각 웰의 반응 혼합물에 0.5 M EDTA (10 μL/웰)를 추가하여 반응을 중단시킵니다. 각 키나아제 분석에 적합한 희석 완충액이 반응 혼합물에 추가됩니다. HTRF 분석에서는 반응 혼합물 50 μL를 96웰 1/2 면적 검은색 EIA/RIA 플레이트로 옮긴 다음, 반응 혼합물에 HTRF 용액 (50 μL/웰)을 추가하고, 여기 파장 337 nm 및 방출 파장 620 nm 및 665 nm에서 시간 분해 형광 검출기로 형광을 측정하여 키나아제 활성을 결정합니다. ELISA에서는 반응 혼합물 50 μL를 아비딘 코팅된 96웰 폴리스티렌 플레이트에서 실온에서 30분 동안 배양합니다. 세척 완충액으로 세척 후, PY20-HRP 용액 (70 μL/웰)을 추가하고 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 배양합니다. 세척 완충액으로 세척 후, TMB 시약 (100 μL/웰)을 각 웰에 추가합니다. 몇 분 (10-30분) 후, 1 M H₃PO₄ (100 μL/웰)을 각 웰에 추가합니다. 키나아제 활성은 마이크로플레이트 리더로 450 nm에서 흡광도를 측정하여 결정됩니다.

• 세포주

  HUVECs

• 농도

  0-10 μM

• 배양 시간

  72 hours

• 방법

  HUVECs (1,000 cells in each well in serum-free medium containing 2% fetal bovine serum) and L6 rat skeletal muscle myoblasts (5,000 cells in each well in serum-free DMEM) are dispensed in a 96-well plate and incubated overnight. This compound and either VEGF (20 ng/mL) or FGF-2 (20 ng/mL) containing 2% fetal bovine serum and PDGFβ (40 ng/mL) are added to each well. Cells are incubated for 3 days and then the ratios of surviving cells are measured by WST-1 reagent. For proliferation assay, samples are duplicated and three separate experiments are done.

• 동물 모델

  H146 tumor cells are implanted subcutaneously (s.c.) into the flank region of female BALB/c nude mice.

• 용량

  ≤100 mg/kg

• 투여

  Administered via p.o.