Molidustat (BAY 85-3934)

생체 외에서, Molidustat (BAY 85-3934)는 HeLa, A549 및 Hep3B 세포에서 저산소증 민감성 유전자의 전사를 유도합니다. [1]

건강한 위스타 쥐와 시노몰거스 원숭이에서, Molidustat (BAY 85-3934) (1.5 mg/kg, p.o.)는 용량 의존적인 EPO 생산 및 적혈구 생성을 유도합니다. 유도된 신장 빈혈을 가진 쥐에서, 이 화합물 (5 mg/kg, p.o.)은 또한 혈압 상승 효과 없이 내인성 EPO 생산을 자극하면서 헤마토크리트 수치를 높이는 데 효과적입니다. [1]

• 프롤릴 하이드록실라제 분석

  바이오틴화된 HIF-1α 556–574 (biotinyl-DLDLEMLAPYIPMDDDFQL)는 흰색 96웰 NeutrAvidin 고결합 용량 플레이트에 결합되며, 이 플레이트는 Blocker Casein으로 사전 차단되고 이어서 1 mM 바이오틴으로 차단됩니다. 고정화된 펩타이드 기질은 20 mM Tris (pH 7.5), 5 mM KCl, 1.5 mM MgCl₂, 20 µM 2-옥소글루타레이트, 10 µM FeSO₄, 2 mM 아스코르베이트, 4% EDTA 없는 프로테아제 억제제를 포함하는 버퍼 100 µl 최종 부피에서 적절한 농도로 첨가된 Molidustat (BAY 85-3934) 유무와 함께 적절한 양의 HIF-PH와 함께 배양됩니다. 반응 시간은 60분입니다. 반응을 중지하기 위해 플레이트는 세척 버퍼로 세 번 세척됩니다. 하이드록실화된 바이오틴일-HIF-1α 556–574는 100 µl 결합 버퍼 (50 mM Tris [pH 7.5], 120 mM NaCl)에서 Eu-VBC와 함께 실온에서 60분 동안 배양됩니다. DELFIA 세척 버퍼로 여섯 번 세척하고 100 µl 증강 용액을 추가한 후, Tecan infinite M200 플레이트 리더를 사용하여 시간 분해 형광을 측정하여 결합된 VBC의 양을 결정합니다. 측정은 삼중 이상으로 수행되며, 결과는 평균 ± SEM으로 표시됩니다. 이 화합물에 대한 IC50 값은 GraphPad Prism 소프트웨어를 사용하여 데이터 세트에 4-매개변수 로지스틱 방정식을 적용하여 곡선 피팅 후 결정됩니다.

• 세포주

  Calu-3 cells

• 농도

  6 μM

• 배양 시간

  24 h

• 방법

  Cells were treated with various concentrations of Molidustat (BAY 85-3934) for 24 h.

• 동물 모델

  Rats with induced renal anemia

• 용량

  5 mg/kg

• 투여

  p.o.