Nirogacestat (PF-03084014)

카탈로그 번호S8018 배치:S801802

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기술 자료

화학식

C27H41F2N5O
분자량 489.64 CAS 번호 1290543-63-3
용해도 (25°C)* 시험관 내(In vitro) DMSO 97 mg/mL (198.1 mM)
Ethanol 97 mg/mL (198.1 mM)
Water Insoluble
생체 내(In Vivo) (개별적으로 순서대로 용매를 제품에 첨가하십시오.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml은 약간 용해되거나 불용해됨을 의미합니다.
* Selleck은 모든 화합물의 용해도를 자체적으로 테스트하며, 실제 용해도는 게시된 값과 약간 다를 수 있습니다. 이는 정상적인 현상이며, 약간의 배치 간 변동으로 인해 발생합니다.
* 실온 배송 (안정성 테스트 결과 이 제품은 냉각 조치 없이 배송될 수 있음을 보여줍니다.)

원액 준비

생물학적 활성

설명 Nirogacestat (PF-03084014, PF-3084014)는 무세포 분석에서 IC50 6.2 nM을 가진 선택적 gamma-secretase 억제제이며, apoptosis를 유도합니다. 2상 연구 중입니다.
표적
gamma-secretase
(cell-free assay)
6.2 nM
시험관 내(In vitro) Nirogacestat (PF-03084014)는 Notch1의 이종이합체화 및 PEST 도메인 모두에 돌연변이가 있는 HPB-ALL 세포를 사용한 세포 분석에서 IC50 13.3 nM로 Notch 수용체 절단을 억제합니다. 이는 HPB-ALL 세포에서 Notch 표적 유전자 Hes-1 및 cMyc 발현을 각각 IC50 <1 nM 및 10 nM로 하향 조절하고, 세포 주기 정지 및 세포자멸사 유도를 통해 일부 인간 T-ALL 세포주(HPB-ALL, DND-41, TALL-1 및 Sup-T1)의 세포 성장을 IC50 30-100 nM로 억제합니다. 이 화합물은 HUVEC의 증식을 IC50 0.5 μM로 감소시키고, 내강 형성을 IC50 값 50 nM로 감소시킵니다. 1 μM에서는 MX1 세포에서 항증식 효과가 없지만, 이동을 95% 억제합니다.
생체 내(In Vivo) Nirogacestat (PF-03084014)를 200 mg/kg의 단일 경구 투여량으로 투여하면 이종이식 HPB-ALL 종양에서 최대 NICD 억제가 약 80% 발생합니다. 이 모드에서 150 mg/kg 용량에서 최대 종양 성장 억제율이 약 92%에 달하는 강력한 항종양 활성을 보이며, NICD/Notch1, 종양 유사분열 지수(Ki67) 및 apoptosis (활성화된 카스파제-3) 염색의 유의미한 감소를 동반합니다. 120 mg/kg에서 이 화합물은 apoptosis, 항증식 작용을 유도하고, 종양 세포의 자가 재생 능력을 감소시키며, 종양 혈관을 손상시키고, 유방암 HCC1599 종양을 가진 생쥐에서 전이 활동을 감소시킵니다. 이 치료는 TGI 값이 최소 50%인 다양한 유형의 유방 이종이식 모델에서 유의미한 항종양 활성을 나타냅니다.

프로토콜 (참조)

키나아제 분석:[3]
  • γ-secretase 분석

    APP (APP695)의 695개 아미노산 동형의 아미노산 596 - 695를 코딩하는 DNA 단편과 C-말단에 Flag 서열 (DYKDDDDK)은 적절히 설계된 올리고뉴클레오티드와 APP695 cDNA를 이용한 PCR 증폭으로 생성됩니다. 번역 시작 부위로 작용하는 Met은 APP695의 596번째 잔기 (β-secretase 절단 부위에 대한 P1 잔기)입니다. 이 DNA 단편은 원핵생물 발현 벡터 pET2-21b에 삽입됩니다. 재조합 단백질 C100Flag는 Escherichia coli [균주 BL21(DE3)]에서 과도하게 생산되고 Mono-Q 컬럼 크로마토그래피로 정제됩니다. C100Flag (1.7 μM)는 CHAPSO, CHAPS (3-[(3-콜아미도프로필)디메틸암모니오]-1-프로판술포네이트) 또는 Triton X-100 (0, 0.125, 0.25, 0.5 또는 1%) 존재 하에 세포막 (0.5 mg/mL)과 버퍼 B (50 mM Pipes, pH 7.0y 5mM MgCl2/5 mM CaCl2/150 mM KCl)에서 37°C로 배양됩니다. 반응은 RIPA (150 mM NaCl/1.0% NP-40/0.5% 데옥시콜산나트륨y 0.1% SDS/50 mM Tris HCl, pH 8.0)를 첨가하고 5분간 끓여 중단됩니다. 샘플을 원심분리하고 상층액 용액은 ECL로 Aβ 펩타이드를 분석합니다. C100Flag의 γ-secretase 매개 처리로 인한 Aβ40 및 Aβ42 관련 제품은 N-말단에 Met을 가지며 따라서 각각 M-Aβ40 및 M-Aβ42로 정의됩니다. 마찬가지로, CHAPSO로 추출된 HeLa 세포막 (가용화된 γ-secretase)으로부터의 상층액 용액 (0.125 mg/mL)은 0.25% CHAPSO를 포함하는 버퍼 B에서 C100Flag (1.7 μM)와 배양되고 이어서 ECL을 사용하여 M-Aβ40 및 M-Aβ42를 분석합니다. 이 화합물, Nirogacestat (PF-03084014)은 실험 컨텍스트에서 사용됩니다.
세포 분석:[1]
  • 세포주

    Human T-ALL cell lines HPB-ALL

  • 농도

    ~1 μM

  • 배양 시간

    7 days

  • 방법

    Cells are seeded in 96-well plates at 10,000 cells/well in growth media supplemented with 10% fetal bovine serum. Serial dilutions of Nirogacestat (PF-03084014) are done in DMSO, appropriate controls or designated concentrations of this compound are added to each well, and cells are incubated at 37℃ for 7 days (final DMSO content 0.1%). Resazurin at a final concentration of 0.1 mg/mL is added to the cells and plates are incubated for 2 to 4 hours. Fluorescent signals are read as emission at 590 nm after excitation at 560 nm.
동물 연구:[1]
  • 동물 모델

    Human T-cell acute lymphoblastic leukemia xenografts HPB-ALL

  • 용량

    150 mg/kg

  • 투여

    p.o. twice daily

참조

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20530712/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22806875/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/10801983/

고객 제품 검증

The expression of p-EGFR and NICD was assessed by western blot after treatment for 3 d.

데이터 출처 [ , , Cell Prolif, 2018, 51(3):e12424 ]

(F) Tumour tissues were further analysed to detect the efficacy of the inhibitors by IHC staining using p-EGFR and Notch1. (4Fa) Notch1 staining was mostly confined on the cell membrane. (4Fc) After Erlotinib treatment, the Notch1 protein was cleaved and translocated to the nucleus. (4Fb) p-EGFR was overexpressed in the control group. (4Fd) Erlotinib treatment inhibited p-EGFR expression. (4Fe-f) PF-03084014 treatment reduced both Notch1 and p-EGFR expression. (4Fg-h) Synthetic therapy reduced the activation of Notch1 and EGFR pathway. Scale bar = 50 μm. *P < .05, **P < .01, ***P < .001

데이터 출처 [ , , Cell Prolif, 2017, doi: 10.1111/cpr.12424 ]

Sellecks Nirogacestat (PF-03084014) 인용됨 21 출판물

Calorie restriction activates a gastric Notch-FOXO1 pathway to expand ghrelin cells [ J Cell Biol, 2024, 223(10)e202305093] PubMed: 38958606
Activation of the γ-secretase/NICD-PXR/Notch pathway induces Taxol resistance in triple-negative breast cancer [ Biochem Pharmacol, 2024, 230(Pt 2):116577] PubMed: 39427919
Multiomic analyses reveal new targets of polycomb repressor complex 2 in Schwann lineage cells and malignant peripheral nerve sheath tumors [ Neurooncol Adv, 2024, 6(1):vdae188] PubMed: 39620202
Inhibition of Notch Signaling Enhances Antitumor Activity of Histone Deacetylase Inhibitor LAQ824 [ Int J Mol Sci, 2023, 24(17)13660] PubMed: 37686467
Simultaneous Inhibition of Ceramide Hydrolysis and Glycosylation Synergizes to Corrupt Mitochondrial Respiration and Signal Caspase Driven Cell Death in Drug-Resistant Acute Myeloid Leukemia [ Cancers (Basel), 2023, 15(6)1883] PubMed: 36980769
In vitro effects of gamma-secretase inhibition in HPV-positive and HPV-negative head and neck squamous cell carcinoma [ Invest New Drugs, 2023, 41(2):193-201] PubMed: 36809443
Pharmacological conversion of gut epithelial cells into insulin-producing cells lowers glycemia in diabetic animals [ J Clin Invest, 2022, 132(24)e162720] PubMed: 36282594
DT7 peptide-modified lecithin nanoparticles co-loaded with γ-secretase inhibitor and dexamethasone efficiently inhibit T-cell acute lymphoblastic leukemia and reduce gastrointestinal toxicity [ Cancer Lett, 2022, 533:215608] PubMed: 35240234
BRAFV600E;K601Q metastatic melanoma patient-derived organoids and docking analysis to predict the response to targeted therapy [ Pharmacol Res, 2022, 182:106323] PubMed: 35752358
Chemical induction of gut β-like-cells by combined FoxO1/Notch inhibition as a glucose-lowering treatment for diabetes [ Mol Metab, 2022, 66:101624] PubMed: 36341906

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