PF-477736

PF-477736 (128 nM)은 CA46 및 HeLa 세포에서 캄프토테신 유발 DNA 손상 체크포인트를 용량 의존적으로 무효화합니다. 이 화합물은 HT29 세포에서 세포 사멸 세포 집단의 해당 증가와 함께 유발 S-기 정지를 효과적으로 무효화합니다. 이 화학 물질 (540 nM)은 HT29 세포에서 시간 및 용량 의존적으로 유발 세포 독성을 강화합니다. 이는 MTT 분석에서 광범위한 p53 결핍 인간 암세포주 패널에서 화학 요법제의 성장 억제 활성을 강화합니다. 이 화합물 (360 nM)을 정지된 세포에 첨가하면 H2AX 인산화 강도가 극적으로 증가하여 DNA 손상 부위 근처에 더 많은 γ-H2AX 분자가 있음을 반영합니다. [1] 이 화학 물질 (0.5 nM)은 HL-60 세포에서 커큐민 존재 하에 p73 및 P53 인산화를 선택적으로 차단합니다. [2] 이것 (360 nM)은 COLO205 세포에서 히스톤 H3 (Ser10) 및 Cdc25C (Ser216)의 유발 인산화를 억제하고 세포 사멸을 강화합니다. [3] 이 화합물 (250 nM)은 MK-1775와 결합하여 OVCAR-5 세포에서 현저한 시너지 세포 독성 활성을 나타냅니다. 이것 (250 nM)은 MK-1775와 결합하여 OVCAR-5 세포에서 2N과 4N 사이의 DNA 함량을 가진 세포의 축적을 유발합니다. 이 화학 물질 (250 nM)은 MK-1775와 결합하여 DNA 복제 종료 전에 조기 유사분열을 유발하며, 손상된 DNA는 OVCAR-5 세포에서 세포 사멸을 초래합니다. [4]

PF-477736 (4 mg/kg 정맥 주사)은 랫트에서 2.9시간의 최종 반감기 (T1/2), 5.72 μg×hr/mL의 AUC 및 11.8 mL/min/kg의 CLp를 나타냅니다. 이 화합물은 Colo205 이종이식 마우스 모델에서 최대 내성 용량의 항종양 활성을 용량 의존적으로 강화합니다. 이 화학 물질 (12 mg/kg)은 Colo205 이종이식 마우스 모델에서 히스톤 H3 (Ser10) 및 인산화 히스톤 H2AX의 인산화 증가를 유도합니다. [1] 이 화합물 (15 mg/kg 복강 내 주사)은 COLO205 및 MDA-MB-231 이종이식 모델에서 유도된 종양 성장 억제 및 종양 성장 지연을 강화합니다. [3] 이 화학 물질 (10 mg/kg 1일 1회 복강 내 주사)은 MK-1775 (30 mg/kg 1일 2회 경구 투여)와 결합하여 OVCAR-5 이종이식을 보유한 마우스에서 더 큰 종양 성장 억제를 유도합니다. [4]

• 결합 분석

  분석은 96웰 플레이트에서 30℃에서 20분 동안 0.1 mL의 분석 버퍼(50 mM TRIS pH 7.5, 0.4 M NaCl, 4 mM PEP, 0.15 mM NADH, 28 units의 젖산 탈수소효소/mL, 16 units의 피루브산 키나제/mL, 3 mM DTT, 0.125 mM Syntide-2, 0.15 mM ATP 및 25 mM 염화마그네슘 포함)에서 수행됩니다. 분석은 1 nM의 CHK1 키나제 도메인으로 시작됩니다. CHK1 활성 억제는 이 화합물의 다양한 농도 존재 하에 초기 속도를 측정하여 결정됩니다. 데이터는 효소 동역학 및 Excel 소프트웨어를 사용하여 분석되고 경쟁적 억제를 위한 동역학 모델에 맞춰 Ki 값을 얻습니다. 이 화학 물질의 키나제 선택성은 1 μM 또는 10 μM에서 약 100개의 단백질 키나제 패널에 대해 스크리닝하여 평가됩니다.

• 세포주

  HT29, Colo205, PC-3, MDA-MB-231 and K562 cells

• 농도

  ~1 μM

• 배양 시간

  96 hours

• 방법

  The IC50 assay measures the antiproliferative effects of PF-477736 on p53-defective human cancer cell lines. Cells in each line are seeded in complete medium at an exponentially growing density in 96-well assay plate and allowed to attach for 16 hours. Serial dilutions of this compound are then done, and appropriate controls are added to each plate. Cells are incubated with drug for 96 hours. After incubation, MTT working stock diluted in complete medium is added to each well, and cells are incubated for 4 hours. After centrifugation and supernatant removal, DMSO is added to each well and plates are read on SpectraMax plate reader at 540 nm.

• 동물 모델

  Colo205 xenograft mouse model

• 용량

  40 mg/kg

• 투여

  intravenous injection