Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml은 약간 용해되거나 불용해됨을 의미합니다. * Selleck은 모든 화합물의 용해도를 자체적으로 테스트하며, 실제 용해도는 게시된 값과 약간 다를 수 있습니다. 이는 정상적인 현상이며, 약간의 배치 간 변동으로 인해 발생합니다. * 실온 배송 (안정성 테스트 결과 이 제품은 냉각 조치 없이 배송될 수 있음을 보여줍니다.)
원액 준비
생물학적 활성
설명
PF-5274857은 강력하고 선택적인 Smoothened (Smo) 길항제로, Hedgehog (Hh) 신호 전달을 각각 5.8 nM 및 4.6 nM의 IC50 및 Ki로 억제하며, 이 화합물은 혈뇌장벽을 통과할 수 있습니다.
표적
Smoothened
Smoothened
4.6 nM(Ki)
5.8 nM
시험관 내(In vitro)
PF-5274857은 MEF 세포에서 Smo 하류 유전자 Gli1의 전사 활성으로 측정한 IC50 2.7 nM으로 Shh 유도 Hh 경로 활성을 완전히 억제합니다. μ-오피오이드 수용체는 기능 분석에서 36 μM의 해리 상수로 나중에 결정된 이 화합물에 의해 약하게 억제됩니다.
생체 내(In Vivo)
PF-5274857은 유의미한 용량 의존적 종양 성장 억제(TGI)를 보이며 고용량(>10 mg/kg)에서 종양 퇴행을 유도합니다. 이 화합물은 Gli1, Gli2, Ptch1 및 Ptch2 유전자 발현 수준을 다양한 정도로 하향 조절하며, 최대 효과는 투여 후 6시간에서 12시간 사이에 달성됩니다(Gli1이 가장 민감한 유전자임). 반면 Smo 수준에는 거의 영향을 미치지 않습니다. 피부 조직에서도 이 화학물질에 의해 Gli1 및 Gli2의 하향 조절이 유사한 시간 경과와 함께 관찰됩니다. Ptch+/−p53+/− 수모세포종 동종이식 마우스에서 이 화합물에 의한 종양 Gli1 mRNA 생산 속도(IC50)의 절반 최대 억제에 대한 모델 유래 약물 농도는 8.9 nM로 결정되었으며, 이는 이 농도에서 6일간의 혈장 노출 후 119% TGI의 종양 퇴행에 수학적으로 해당합니다. Ptch+/−p53−/− 수모세포종 동종이식 마우스에서 IC50 값은 3.5 nM로 추정되었으며, 이는 Ptch+/−p53+/− 결과와 일치합니다. 또한 투여 후 4시간 이내에 쥐의 혈뇌장벽을 통과할 수 있습니다.
인간 Smo(아미노산 181-787)를 과발현하는 HEK293 세포는 10% FBS, Pen-Strep 및 0.1 mg/mL 하이그로마이신이 보충된 Dulbecco's Modified Eagle's Media(DMEM)에서 90% 밀도까지 배양됩니다. 차가운 Dulbecco's PBS로 세척한 후, 세포 펠렛은 막 준비 완충액(50 mM Tris-HCl, pH 7.5, 250 mM 수크로스 및 Roche 완전 프로테아제 칵테일)에 재현탁되고 균질화됩니다. 균질액은 원심분리되고 세포 펠렛은 분석 완충액(50 mM Tris-HCl, pH 7.5, 100 mM NaCl, 25 mM MgCl2, 1 mM EDTA 및 0.1% 프로테아제 없는 소 혈청 알부민)에 재현탁되고 유리 조직 분쇄기로 균질화됩니다. Smo를 포함하는 막 준비물 내 총 단백질은 Pierce BCA 단백질 분석을 사용하여 결정됩니다. 경쟁적 결합 분석을 위해 96웰 GF/B 필터 플레이트에 100 μL의 분석 완충액을 10분 동안 추가하여 필터를 미리 적신 다음 제거합니다. 이어서 다음 시약이 추가됩니다: 20 μL의 분석 완충액, 10 μL의 이 화합물 연속 희석액, 20 μL의 3H-Smo 길항제(최종 농도 3 nM) 및 50 μL의 막 준비물(총 단백질 40 μg). 플레이트는 실온에서 2시간 동안 배양된 후 세척하고 진공 건조됩니다. 플레이트는 45 μL의 Microscint 20을 추가하기 전에 60°C 오븐에서 1시간 동안 건조되고 실온에서 30분에서 1시간 동안 배양된 후 TopCount 섬광 계수기로 계수됩니다. 데이터는 GraphPad Prism 소프트웨어를 사용하여 분석됩니다.
Gli-Luc/MEF cells are grown in the knockout DMEM supplemented with 10% heat-inactive FBS, 2 mM l-glutamine, and 0.55 mM β-mercaptoethanol until 90% confluence. On day 1, cells are trypsinized and seeded into white 384-well plates in 20 μL per well of OptiMEM media that is supplemented with 1% heat-inactive FBS and 1 mM sodium pyruvate at a concentration of 7,500 cells per well. Plates are incubated at 37 °C and 5% CO2 overnight. On day 2, this compound is added to the cells at a final concentration ranging from 3 μM to 50 pM at a 3-fold serial dilution followed by addition of recombinant mouse Sonic Hedgehog to a final concentration of 2 μg/mL. The cells are incubated with this chemical and Shh for 48 hours at 37 °C and 5% CO2. Luciferase assays are conducted on day 4 using the Bright-Glo Luciferase Assay System. Briefly, Bright-Glo luciferase reagent (25 μL) is added to each well of the 384-well plate containing media. Plates are kept at room temperature for 5 minutes and then read on a Luminescence plate reader. The IC50 value of this compound is calculated.
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