PHA-767491 HCl

카탈로그 번호S2742 배치:S274201

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기술 자료

화학식

C12H11N3O.HCl
분자량 249.7 CAS 번호 942425-68-5
용해도 (25°C)* 시험관 내(In vitro) DMSO 24 mg/mL (96.11 mM)
Water Insoluble
Ethanol Insoluble
생체 내(In Vivo) (개별적으로 순서대로 용매를 제품에 첨가하십시오.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml은 약간 용해되거나 불용해됨을 의미합니다.
* Selleck은 모든 화합물의 용해도를 자체적으로 테스트하며, 실제 용해도는 게시된 값과 약간 다를 수 있습니다. 이는 정상적인 현상이며, 약간의 배치 간 변동으로 인해 발생합니다.
* 실온 배송 (안정성 테스트 결과 이 제품은 냉각 조치 없이 배송될 수 있음을 보여줍니다.)

원액 준비

생물학적 활성

설명 PHA-767491 (CAY10572, NMS 1116354) HCl은 무세포 분석에서 IC50이 각각 10 nM 및 34 nM인 강력한 ATP 경쟁적 이중 Cdc7/CDK9 억제제입니다. 이는 CDK1/2 및 GSK3-β에 대해 ~20배, MK2 및 CDK5에 대해 50배, PLK1 및 CHK2에 대해 100배의 선택성을 보입니다.
표적
Cdc7
(Cell-free assay)		 CDK9
(Cell-free assay)		 GSK-3β
(Cell-free assay)		 CDK2
(Cell-free assay)		 CDK1
(Cell-free assay)		 더 보기
10 nM 34 nM 220 nM 240 nM 250 nM
시험관 내(In vitro)

PHA-767491은 Cdk1, Cdk2 및 GSK3-β에 대해 약 20배, MK2 및 Cdk5에 대해 50배, PLK1 및 CHK2에 대해 100배의 선택성을 보입니다. PHA-767491은 SF-268에 대해 0.86 μM, K562에 대해 5.87 μM의 IC50으로 다양한 인간 세포주에서 세포 증식을 억제하며, 소수의 세포주에서만 작용하는 5-FU와 달리 거의 모든 세포주에서 p53 비의존적인 방식으로 세포자멸사를 유의하게 유도합니다. 기존 DNA 합성 억제제와 달리, 5 μM 농도의 PHA-767491 처리는 Cdc7 키나제 및 Cdc7 의존성 Ser40 부위의 Mcm2 인산화를 특이적으로 억제하여 DNA 복제 개시를 차단하지만 복제 포크 진행은 차단하지 않습니다. ABT-737 내성 OCI-LY1 및 SU-DHL-4 세포에서 상향 조절된 Mcl-1 수준은 3 μM 농도의 PHA-767491 처리로 인해 Cdk9 억제로 인해 유의하게 감소될 수 있으며, 이는 ABT-737에 대한 감수성 회복으로 이어집니다. PHA-767491의 직접적인 미토콘드리아 의존성 세포자멸사 유도 효과는 EC50 0.34-0.97 μM의 유사한 메커니즘을 통해 휴지기 만성 림프성 백혈병(CLL) 세포에 1 μM로 적용했을 때도 관찰됩니다. 반면 CD154 및 인터루킨-4에 의해 자극된 증식성 CLL 세포에서는 5 μM 농도의 PHA-767491 처리가 세포 사멸을 유발하기보다는 Cdc7 억제를 통해 DNA 합성을 폐지합니다.

생체 내(In Vivo)

5일 동안 하루 두 번 PHA-767491을 투여하면 HL60 이종이식의 성장을 용량 의존적으로 유의하게 억제하며, 20 mg/kg 및 30 mg/kg 용량에서 각각 50% 및 92%의 TGI를 보입니다. 이러한 효과는 A2780, Mx-1 및 HCT-116 이종이식 모델과 유방암에서도 현저하며, Cdc7 억제 및 Cdc7 의존성 Ser40 부위에서 Mcm2 인산화 감소와 관련이 있습니다

특징 DNA 복제에서 신장(elongation)이 아닌 시작(initiation)을 제어하는 메커니즘에 직접적으로 영향을 미치는 최초의 억제제.

프로토콜 (참조)

키나아제 분석:

[1]
  • 시험관 내 키나제 분석

    PHA-767491 (IC50)에 의한 Cdc7 및 CDK9 억제는 강력한 음이온 교환기(Dowex 1-X8 수지, 포름산염 형태) 기반 분석법을 사용하여 결정됩니다. 각 효소에 대해 ATP 및 특정 기질에 대한 절대 Km 값이 먼저 결정되며, 각 분석은 최적화된 ATP/33P-γ-ATP 혼합물(2Km) 및 기질(5Km) 농도에서 수행됩니다. Cdc7 키나제 분석은 50 mM Hepes pH 7.9, 15 mM MgCl2, 2 mM β-글리세로포스페이트, 0.2 mg/mL BSA, 1 mM DTT, 3 μM Na3VO4, 2Km ATP/33P-γ-ATP 혼합물, 5Km Mcm2 (aa 10-294), 37 nM 재조합 Cdc7/Dbf4 및 증가하는 농도의 PHA-767491을 포함하는 완충액에서 최종 부피 30 μL로 수행되며, 25 °C에서 1시간 동안 배양됩니다. CDK9 키나제 분석은 50 nM 재조합 Cdk9/사이클린 T를 사용하여 50 mM HEPES pH 7.5, 10 mM MgCl2, 1 mM DTT, 3 μM Na3VO4, 2Km ATP/33P-γ-ATP 혼합물, 5Km RNA 폴리머라제 CDT 펩타이드 및 증가하는 농도의 PHA-767491을 포함하는 완충액에서 최종 부피 30 μL로 수행되며, 25 °C에서 1시간 동안 배양됩니다. 배양 후, 150 μL의 수지/포름산염(pH 3.0)을 첨가하여 반응을 중단하고 미반응 33P-γ-ATP를 포획하여 용액 내 인산화된 기질과 분리합니다. 1시간 휴식 후, 50 μL의 상층액을 Optiplate 96웰 플레이트로 옮깁니다. 150 μL의 Microscint 40을 첨가한 후, TopCount에서 방사능을 측정합니다.
세포 분석:

[1]
  • 세포주

    HeLa, MCF7, HCT-116, U2OS, A2780, K562, SF-539, SF-268, Ovcar8, SW480, COLO205, HCT-15, Jurkat, PC3, and NHDF

  • 농도

    Dissolved in DMSO, final concentrations ~ 20 μM

  • 배양 시간

    24 or 72 hours

  • 방법

    Cells are exposed to PHA-767491 for 24 or 72 hours. Cells are lysed and the ATP content in the well, used as a measure of viable cells, is determined using a thermostable firefly luciferase–based assay. Activation of caspase-3 and caspase-7 is measured as a ratio between treated sample and untreated control with a luciferase-based assay, containing a specific proluminescent substrate. DNA replication is measured as incorporation of nucleotide analog BrdU into DNA by flow cytometry.
동물 연구:

[1]
  • 동물 모델

    Female SCID mice subcutaneously implanted with HL60 cells, male Hsd, athymic nu-nu mice subcutaneously implanted with HCT116 cells, A2780 or Mx-1 cells, and female Sprague-Dawley rats with mammary carcinomas

  • 용량

    ~50 mg/kg

  • 투여

    Intravenous or oral administration twice a day

참조

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18469809/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20197552/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21768328/

고객 제품 검증

<p>Viability at 250 nM and CI vs. Fa for U2932 following 24 hours exposure to ABT-199, additional drugs with activity against CDK9, or the combinations. Mean of quadruplicates ± SEM.</p>

, , Leukemia, 2015, 29(8):1702-12.

Sellecks PHA-767491 HCl 인용됨 47 출판물

The DNA replication machinery transmits dual signals to prevent unscheduled licensing and execution of centrosome duplication [ Nat Commun, 2025, 16(1):7799] PubMed: 40921755
Combined therapy with DR5-targeting antibody-drug conjugate and CDK inhibitors as a strategy for advanced colorectal cancer [ Cell Rep Med, 2025, S2666-3791(25)00231-9] PubMed: 40449480
p53-dependent crosstalk between DNA replication integrity and redox metabolism mediated through a NRF2-PARP1 axis [ Nucleic Acids Res, 2024, gkae811] PubMed: 39315696
ATR limits Rad18-mediated PCNA monoubiquitination to preserve replication fork and telomerase-independent telomere stability [ EMBO J, 2024, 43(7):1301-1324] PubMed: 38467834
Loss of POLE3-POLE4 unleashes replicative gap accumulation upon treatment with PARP inhibitors [ Cell Rep, 2024, 43(5):114205] PubMed: 38753485
Single-cell analysis reveals host S phase drives large T antigen expression during BK polyomavirus infection [ PLoS Pathog, 2024, 20(12):e1012663] PubMed: 39636788
Multiplex single-cell chemical genomics reveals the kinase dependence of the response to targeted therapy [ Cell Genom, 2024, 4(2):100487] PubMed: 38278156
K6-linked ubiquitylation marks formaldehyde-induced RNA-protein crosslinks for resolution [ Mol Cell, 2023, 10.1016/j.molcel.2023.10.011] PubMed: 37951215
ATR protects ongoing and newly assembled DNA replication forks through distinct mechanisms [ Cell Rep, 2023, 42(7):112792] PubMed: 37454295
The nucleolar protein GNL3 prevents resection of stalled replication forks [ EMBO Rep, 2023, 24(12):e57585] PubMed: 37965896

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