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생물학적 설명
| 특이성 | Phospho-Tau (Ser262) Antibody [N15P23]는 Ser262에서 인산화된 경우에만 전체 타우 단백질의 내인성 수준을 검출합니다. |
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| 배경 | Phospho-Tau (Ser262)는 프롤린이 풍부한 미세소관 결합 반복 도메인(R1/R2 접합부) 내 세린 262에서 인산화된 미세소관 관련 단백질 타우를 지칭하며, 4개의 불완전한 미세소관 결합 반복(MTBRs)과 275-VQIVYK283 KXGS 모티프를 포함하는 본래 구조화되지 않은 이소형(0N, 1N, 2N 변이체)으로 존재합니다. Ser262에서의 인산화는 종종 pSer356과 함께 나타나며, MARK2/Par-1 키나제에 의해 프라이밍된 KXGS 에피토프를 방해하고 미세소관 격자와 입체적으로 간섭하여 β-튜불린에 대한 타우의 친화도를 급격히 감소시킵니다(Kd 변화 >10배). 칼페인 절단 또는 CDK5/p25 과활성화를 통해 MARK2를 활성화하는 아밀로이드-β 올리고머에 의해 시작된 이 인산화 이벤트는 pSer262가 R1/R2 반복 간 루프를 무질서한 상태로 고정함으로써 형태 변화에 의한 결합 해리를 통해 빠른 미세소관 탈중합을 유발하고, 이로 인해 GSK3β/Fyn에 의한 프라이밍을 위한 원위 인산화 부위(Ser202/Thr205, Ser396/Ser404)가 노출됩니다. 이 순차적인 인산화는 뉴런 흡수 및 세포외 배출을 통한 트랜스 시냅스 전파가 가능한 독성 4R-전섬유성 씨앗으로 타우 올리고머화를 촉진하는 동시에, 타우가 축삭에서 체성수상돌기 구획으로 잘못 위치하게 합니다. 생리적으로, PP2A 매개 탈인산화를 통한 pSer262의 일시적인 순환은 신경 가소성 동안 미세소관 역학을 조절하지만, 알츠하이머병(Braak I-II)에서 증가된 만성 과인산화는 신경섬유 엉킴(NFT) 형성보다 수년 앞서 발생하며, pSer262는 뇌척수액(pTau262/tau 비율)에서 검출 가능한 "초기 문지기" 바이오마커로서 Aβ42 시냅스 독성, 시냅스 손실 및 인지 저하를 매개하며, 성숙한 쌍나선 필라멘트(PHF)보다 과립성 전엉킴에 대한 특이성을 가집니다. |
사용 정보
| 응용 | IHC, ELISA | 희석 |
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|---|---|---|---|---|---|
| 반응성 | Human | ||||
| 출처 | Mouse Monoclonal Antibody | MW | 33-79 kDa | ||
| 보관 완충액 | PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 | 보관 (수령일로부터) |
-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years | ||
| IHC |
Experimental Protocol：
Deparaffinization/Rehydration
1. Deparaffinize/hydrate sections:
2. Incubate sections in three washes of xylene for 5 min each.
3. Incubate sections in two washes of 100% ethanol for 10 min each.
4. Incubate sections in two washes of 95% ethanol for 10 min each.
5. Wash sections two times in dH2O for 5 min each.
6.Antigen retrieval: For Citrate: Heat slides in a microwave submersed in 1X citrate unmasking solution until boiling is initiated; continue with 10 min at a sub-boiling temperature (95°-98°C). Cool slides on bench top for 30 min.
Staining
1. Wash sections in dH2O three times for 5 min each.
2. Incubate sections in 3% hydrogen peroxide for 10 min.
3. Wash sections in dH2O two times for 5 min each.
4. Wash sections in wash buffer for 5 min.
5. Block each section with 100–400 µl of blocking solution for 1 hr at room temperature.
6. Remove blocking solution and add 100–400 µl primary antibody diluent in to each section. Incubate overnight at 4°C.
7. Remove antibody solution and wash sections with wash buffer three times for 5 min each.
8. Cover section with 1–3 drops HRPas needed. Incubate in a humidified chamber for 30 min at room temperature.
9. Wash sections three times with wash buffer for 5 min each.
10. Add DAB Chromogen Concentrate to DAB Diluent and mix well before use.
11. Apply 100–400 µl DAB to each section and monitor closely. 1–10 min generally provides an acceptable staining intensity.
12. Immerse slides in dH2O.
13. If desired, counterstain sections with hematoxylin.
14. Wash sections in dH2O two times for 5 min each.
15. Dehydrate sections: Incubate sections in 95% ethanol two times for 10 sec each; Repeat in 100% ethanol, incubating sections two times for 10 sec each; Repeat in xylene, incubating sections two times for 10 sec each.
16. Mount sections with coverslips and mounting medium.
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참조
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