PNU-120596

카탈로그 번호S2629 배치:S262902

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기술 자료

화학식

C13H14ClN3O4
분자량 311.72 CAS 번호 501925-31-1
용해도 (25°C)* 시험관 내(In vitro) DMSO 62 mg/mL (198.89 mM)
Ethanol 1 mg/mL (3.2 mM)
Water Insoluble
생체 내(In Vivo) (개별적으로 순서대로 용매를 제품에 첨가하십시오.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml은 약간 용해되거나 불용해됨을 의미합니다.
* Selleck은 모든 화합물의 용해도를 자체적으로 테스트하며, 실제 용해도는 게시된 값과 약간 다를 수 있습니다. 이는 정상적인 현상이며, 약간의 배치 간 변동으로 인해 발생합니다.
* 실온 배송 (안정성 테스트 결과 이 제품은 냉각 조치 없이 배송될 수 있음을 보여줍니다.)

원액 준비

생물학적 활성

설명 PNU-120596 (Nsc 216666)은 α7 nAChR의 양성 알로스테릭 조절제이며 EC50은 216 nM입니다.
표적
α7 nAChR
216 nM(EC50)
시험관 내(In vitro) PNU-120596은 조작된 인간 α7 nAChR 변이에 의해 매개되는 작용제(Ach) 유발 칼슘 유입을 증가시킵니다. 이 화합물은 야생형 수용체에 의해 매개되는 작용제(콜린 및 Ach) 유발 전류를 증가시키며, Xenopus 난모세포에서 작용제가 지속적으로 존재하는 경우 유발 반응의 현저한 연장을 보여줍니다. 이는 α7 nAChRs의 채널 평균 개방 시간을 증가시키지만 이온 선택성에는 영향을 미치지 않으며, 단위 전도도에는 거의 영향을 미치지 않습니다. 급성 해마 슬라이스에 적용했을 때, 이 화학 물질은 피라미드 뉴런에서 측정된 Ach 유발 GABA성 시냅스 후 전류의 빈도를 증가시킵니다. 이 효과는 TTX에 의해 억제되는데, 이는 해마 개재뉴런의 몸체수상돌기 막에 위치한 α7 nAChRs의 기능을 조절함을 시사합니다. α7 nAChR에 대한 양성 조절 외에도, 이 화합물은 탈감작 역학의 심오한 지연을 유도하여 α7 nAChR의 과도한 자극을 통한 Ca2+ 유도 독성의 가능성을 높입니다. α7 nAChR에 결합하는 동안 내부 베타 시트, 전이 영역 및 작용제 결합 부위에서 시스테인 접근성에 변화를 일으킵니다. 이 화학 물질의 결합 부위는 작용제 결합 부위에 있지 않으며, Ach에 의해 촉진되는 게이팅 형태와 유사하지만 동일하지 않은 형태 변화 효과를 유발함으로써 니코틴 수용체의 작용제 유발 게이팅을 향상시킵니다.
생체 내(In Vivo) PNU-120596 (1 mg/kg)을 쥐에게 전신 투여하면 조현병과 관련된 회로 수준 교란을 반영하는 것으로 제안된 모델인 암페타민으로 인한 청각 게이팅 결함을 개선합니다. 카라기난 전에 투여했을 때, 이 화합물 30 mg/kg은 기계적 통각과민 및 체중 부하 결함을 최대 4시간 동안 유의하게 완화시킵니다. 이 화학 물질은 뒷발 부종 내 TNF-α 및 IL-6 수준의 카라기난 유발 증가를 완화시켰으며, 디클로페낙은 IL-6 수준만 완화시켰습니다. 카라기난 또는 CFA에 의해 유발된 확립된 기계적 통각과민도 이 약물에 의해 부분적으로 역전됩니다.

프로토콜 (참조)

키나아제 분석:[1]
  • Ca2+ 형광 분석

    α7 nAChR 변이체(α7*)를 발현하는 SH-EP1 인간 상피 세포는 비필수 아미노산을 함유하는 최소 필수 배지(MEM)에서 10% 소 태아 혈청, L-글루타민, 100 U/ml 페니실린/스트렙토마이신, 250 ng/mL 펀지존, 400 μg/mL 하이그로마이신 B 및 800 μg/mL 제네티신을 보충하여 배양됩니다. α7*은 인간 α7 nAChR의 변이체이며, 첫 번째 막관통 도메인에 두 개의 점 돌연변이(T230P 및 C241S)를 가지고 있어 SH-EP1 세포에서 높은 기능적 발현을 가능하게 합니다 [Groppi VE, Wolfe ML, Berkenpas MB (2003) U.S. Patent 6,693,172 B1]. 세포는 37 °C, 6% CO2 배양기에서 배양됩니다. 세포는 분석 2일 전에 트립신 처리되어 어두운 측벽과 투명한 바닥이 있는 96웰 플레이트에 2 × 104 세포/웰의 밀도로 플레이팅됩니다. 세포는 무수 디메틸설폭사이드에 Calcium Green-1 AM과 20% 플루로닉 F-127 혼합물로 로딩됩니다. 이 시약은 각 웰의 성장 배지에 직접 첨가되어 2 μM Calcium Green-1 AM의 최종 농도를 얻습니다. 세포는 염료에서 37 °C에서 1시간 동안 배양된 후 Mark의 변형 Earle의 균형 염 용액(MMEBSS)으로 4회 세척됩니다. MMEBSS는 다음(mM)으로 구성됩니다: 4 CaCl2, 0.8 MgSO4, 20 NaCl, 5.3 KCl, 5.6 D-글루코스, 20 Tris-HEPES, 및 120 N-메틸-D-글루카민, pH 7.4. 네 번째 세척 후, 세포는 37 °C에서 최소 10분 동안 배양됩니다. 각 웰의 MMEBSS 최종 부피는 100 μL이며 아트로핀은 모든 웰에 1 μM의 최종 농도로 첨가됩니다. 형광 이미징 플레이트 리더(FLIPR; Molecular Devices, Union City, CA)는 500 mW의 전력을 사용하여 488 nm에서 Calcium Green을 여기시키고 >525 nm의 형광 방출을 읽도록 설정됩니다. 각 웰을 조명하기 위해 0.5초 노출이 사용됩니다. 형광은 F-스톱이 2.0 또는 1.2로 설정된 상태에서 감지됩니다. 30초의 기준선 기록 후, 시험 화합물은 96웰 플레이트의 각 웰에 50 μL의 3 × 스톡 용액으로 첨가됩니다. 각 실험에서 4개의 웰은 차량(0.2% DMSO) 대조군으로 사용됩니다.
세포 분석:[2]
  • 세포주

    SH-SY5Y-α7 cells

  • 농도

    3-10 μM

  • 배양 시간

    24 hours

  • 방법

    SH-SY5Y-α7 cells are plated on 96-well plates at a density of 15,000 cells per well (100 μL of 1.5 × 105 cells per mL) in complete growth medium and placed into a 37 °C incubator for 20 to 24 hours. Complete growth medium then is replaced with experimental medium alone ("PNU-120596 free") or containing appropriate concentrations of this compound and returns to the 37 °C ncubator for 20 to 24 hours. The medium is then replaced with fresh experimental medium and 20 μL per well MTS solution and returned to the 37 °C incubator for 3 hours, after which the plate is read on a microplate spectrophotometer at an absorbance of 490 nm. For all data analysis, data are normalized to untreated compound-free wells (100% cell viability) and a background absorbance taken from wells containing experimental medium and MTS solution.
동물 연구:[1]
  • 동물 모델

    male Sprague Dawley rats (weighing 250–300 g)

  • 용량

    1 mg/kg

  • 투여

    PNU-120596 is intravenously administrated 5 minutes before auditory gating measurements.

참조

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15858066/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/17470817/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/19411608/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22536953/

고객 제품 검증

<p>C) A summary: MCAO-induced infarct volumes were significantly smaller in treated vs. untreated animals: p=0.0147 (n=10; two-tailed, the Mann–Whitney U-test). The results are presented as mean+S.E.M.<br /> </p>

, , PLoS One, 2013, 8(8): e73581.

PNU-120596 significantly reduces the size of brain injury induced by focal cerebral ischemia. Focal cerebral ischemia was induced by a transient (90 min) middle cerebral artery occlusion (MCAO). Then, 6 hrs post-MCAO, animals were given i.v. injections of either 1 mg/kg PNU-120596 dissolved in DMSO at 50 mM (i.e., treated group; n=10) or the matched amount of DMSO only (i.e., untreated group; n=10). Typical examples of injured whole-brain coronal sections (2 mm thick) obtained from untreated (i.e., DMSO only) (A) and treated (1 mg/kg PNU-120596) (B) animals. Treated and untreated animals were anesthetized and euthanized 24 hrs after MCAO (i.e., 18 hrs after PNU-120596 or DMSO injections) and brain sections were prepared for histological analysis. C) A summary: MCAO-induced infarct volumes were significantly smaller in treated vs. untreated animals: p=0.0147 (n=10; two-tailed, the Mann–Whitney U-test). The results are presented as mean+S.E.M.

데이터 출처 [ , , PLoS One, 2013, 8(8):e73581. ]

Sellecks PNU-120596 인용됨 9 출판물

Systemic Administration of α7-Nicotinic Acetylcholine Receptor Ligands Does Not Improve Renal Injury or Behavior in Mice With Advanced Systemic Lupus Erythematosus [ Front Med (Lausanne), 2021, 8:642960] PubMed: 33928103
Inhibitory effect of sinomenine on lung cancer cells via negative regulation of α7 nicotinic acetylcholine receptor [ J Leukoc Biol, 2020, 10.1002/JLB.6MA0720-344RRR] PubMed: 32726882
Alpha 7 nicotinic receptor agonist and positive allosteric modulators improved social and molecular deficits of MK-801 model of schizophrenia in rats. [ Pharmacol Biochem Behav, 2020, 10.1016/j.pbb.2020.172916] PubMed: 32220620
Investigating the Binding Interactions of NS6740, a Silent Agonist of the Nicotinic Receptor [ Mol Pharmacol, 2019, 10.1124/mol.119.116244] PubMed: 31175182
Boosting Endogenous Resistance of Brain to Ischemia. [Sun F, et al. Mol Neurobiol, 2017, 54(3):2045-2059] PubMed: 26910820
Boosting Endogenous Resistance of Brain to Ischemia [Sun F, et al. Mol Neurobiol, 2016, 10.1007/s12035-016-9796-3] PubMed: 26910820
An Unaltered Orthosteric Site and a Network of Long-Range Allosteric Interactions for PNU-120596 in α7 Nicotinic Acetylcholine Receptors [ Chem Biol, 2015, 22(8):1063-73] PubMed: 26211363
A positive allosteric modulator of α7 nAChRs augments neuroprotective effects of endogenous nicotinic agonists in cerebral ischaemia [ Br J Pharmacol, 2013, 169(8):1862-78] PubMed: 23713819
A Type-II Positive Allosteric Modulator of α7 nAChRs Reduces Brain Injury and Improves Neurological Function after Focal Cerebral Ischemia in Rats. [Sun F, et al. PLoS One, 2013, 8(8): e73581] PubMed: 23951360

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