PP2 (AGL 1879)

카탈로그 번호S7008 배치:S700801

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기술 자료

화학식

C15H16ClN5
분자량 301.77 CAS 번호 172889-27-9
용해도 (25°C)* 시험관 내(In vitro) DMSO 60 mg/mL (198.82 mM)
Ethanol 2 mg/mL (6.62 mM)
Water Insoluble
생체 내(In Vivo) (개별적으로 순서대로 용매를 제품에 첨가하십시오.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution
5%DMSO 40%PEG300 5%Tween80 50%ddH2O

Selleck 연구소에서 검증했습니다. 이 제형에 대한 조정이 필요한 경우 맞춤형 테스트를 위해 당사 영업팀에 문의하십시오.

 1.250mg/ml (4.14mM) Taking the 1 mL working solution as an example, add 50μL of clarified DMSO stock solution of 25mg/ml to 400μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify it; then continue to add 500μL of ddH2O to adjust the volume to 1mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results. 
* <1 mg/ml은 약간 용해되거나 불용해됨을 의미합니다.
* Selleck은 모든 화합물의 용해도를 자체적으로 테스트하며, 실제 용해도는 게시된 값과 약간 다를 수 있습니다. 이는 정상적인 현상이며, 약간의 배치 간 변동으로 인해 발생합니다.
* 실온 배송 (안정성 테스트 결과 이 제품은 냉각 조치 없이 배송될 수 있음을 보여줍니다.)

원액 준비

생물학적 활성

설명 Src 계열 키나아제 억제제인 PP2 (AG 1879, AGL 1879)는 세포 비의존성 분석에서 4 nM/5 nM의 IC50으로 Lck/Fyn을 강력하게 억제하며, EGFR에는 ~100배 덜 강력하고 ZAP-70, JAK2 및 PKA에는 비활성이다.
표적
LCK
(Cell-free assay)		 Fyn
(Cell-free assay)
4 nM 5 nM
시험관 내(In vitro)

PP2는 ATP 결합 도메인과 겹치지 않는 분자 영역에 결합하여 Src를 억제합니다. 이 화합물 (20 μM)은 HT29 세포의 40-50% 성장을 억제하며, 이 농도는 1시간 이내에 Src 활성을 감소시키고 2일 동안 Src 활성의 35% 억제를 유지합니다. 이 화합물 (100 mM)은 HT29 세포의 Src 활성을 용량 의존적으로 감소시킵니다. 이 화학 물질 (1 mM-100 mM)은 인간 결장암 세포 (HT29, SW480 및 PMCO1), 간암 세포 (PLC/PRF/5, KYN-2, Li7 및 HepG2) 및 유방암 세포 (MCF-7, MDA-MB-468 및 BT-474)의 용량 의존적 성장 억제를 유발합니다. 이 화합물 (20 μM)은 E-카드헤린 의존적인 방식으로 대부분의 암 세포 (HT29, SW480, PMCO1, PLC/PRF/5, KYN-2, Li7, MCF-7 및 MDA-MB-468)에서 응집을 유의하게 증가시킵니다. 이 화합물 (20 μM)은 E-카드헤린 발현을 향상시키고 암 세포에서 E-카드헤린과 액틴 세포골격의 연관성도 강하게 증가시킵니다. 이 화합물 (20 μM)은 HT29 세포에서 α-카테닌, β-카테닌 및 γ-카테닌의 발현을 증가시키는 반면, PLC/PRF/5 및 MCF-7 세포에서는 α-카테닌의 총 단백질 수준은 변하지 않지만, β-카테닌 및 γ-카테닌의 수준은 약간 증가합니다. 이 억제제는 시간 및 용량 의존적인 방식으로 두 가지 자궁경부암 세포 (HeLa 및 SiHa)의 증식을 억제합니다. 이 화합물 (10 μM)은 HeLa 및 SiHa 세포에서 pSrc-Y416, pEGFR-Y845 및 -Y1173 발현 수준을 하향 조절합니다. 이 화학 물질 (10 μM)은 HeLa 및 SiHa 세포 모두에서 p21(Cip1) 및 p27(Kip1)을 상향 조절하고 HeLa에서 사이클린 A 및 사이클린 의존성 키나아제-2, -4 (Cdk-2, -4)의 발현을 하향 조절하며 SiHa에서 사이클린 B 및 Cdk-2의 발현을 하향 조절하여 세포 주기 정지를 조절할 수 있습니다.

생체 내(In Vivo)

PP2 (5 mg/kg/일)는 비장에 HT29 세포를 접종한 SCID 마우스에서 차량으로 처리된 대조군에 비해 원발성 종양의 성장 속도를 일부 늦춥니다. 이 화합물은 비장에 HT29 세포를 접종한 SCID 마우스에서 차량으로 처리된 대조군에 비해 원발성 종양의 성장 속도를 일부 늦춥니다. 이 화학 물질은 비장에 HT29 세포를 접종한 SCID 마우스에서 대조군에 비해 상대적인 간 무게와 간 전이 부피를 유의하게 감소시킵니다. 이 화합물 (1.5 mg/kg i.p.)로 처리된 쥐는 국소 뇌 허혈성 손상이 있는 쥐에서 대조군에 비해 T2 강조 MRI 및 TTC 염색에서 경색 크기가 약 50% 감소했습니다. 이 화학 물질은 국소 뇌 허혈성 손상이 있는 쥐에서 대조군보다 더 나은 신경학적 점수를 보입니다.

프로토콜 (참조)

키나아제 분석:

[1]
  • 면역 복합체 효소 분석

    산 처리된 에놀라아제는 Nunc 96웰 고단백 결합 분석 플레이트에 웰당 100 μL를 분주하기 전에 1× PBS로 1:20 희석합니다. 분석 웰은 흡인된 다음, 0.5% 소 혈청, 1× PBS로 37 ℃에서 1시간 동안 차단하고, 1× PBS/웰 300 μL로 5회 세척합니다. Lck의 공급원은 LSTRA 세포 또는 백시니아 발현 시스템을 사용하여 HeLa 세포에서 발현된 Lck입니다. FynT는 백시니아 시스템을 사용하여 HeLa 세포에서 발현됩니다. 세포 (12.5×106/mL)는 용해 버퍼에 용해되고, 용해물은 에펜도르프 튜브에서 4 ℃에서 15분 동안 14,000 cpm으로 원심 분리하여 정제합니다. 정제된 용해물은 적절한 항-키나아제 항체와 함께 10 μg/mL 농도로 4 ℃에서 2시간 동안 배양합니다. 프로테인 A-세파로스 비드는 항체/용해물 혼합물에 250 μL/mL로 첨가하고 4 ℃에서 30분 동안 배양합니다. 비드는 용해 버퍼 1 mL로 두 번, 키나아제 버퍼 (25 mM HEPES, 3 mM MnCl2, 5 mM MgCl2, 100 μM 오르토바나듐산나트륨) 1 mL로 두 번 세척하고 키나아제 버퍼에 50% (w/v)로 재현탁합니다. 비드 현탁액 25 μL를 에놀라아제 코팅된 96웰 고단백 결합 플레이트의 각 웰에 이 화합물의 적절한 농도와 [γ-32P]ATP (키나아제 버퍼에 200 μCi/mL 용액 25 μL/웰)와 함께 첨가합니다. 20 ℃에서 20분 동안 배양한 후, 10 mM ATP를 함유하는 끓는 2× 용해 버퍼 60 μL를 분석 웰에 첨가하여 반응을 종료합니다. 샘플 30 μL를 웰에서 제거하고, 5분 동안 끓인 다음, 7.5% SDS-폴리아크릴아미드 겔에 로딩합니다. 겔은 이후 건조되고 Kodak X-AR 필름에 노출됩니다. 정량화를 위해 필름은 Molecular Dynamics 레이저 스캐너를 사용하여 스캔하고, 주요 기질 밴드인 에놀라아제 p46의 광학 밀도를 결정합니다. Lck에 대한 이 화학 물질의 활성을 측정하기 위한 보조 실험에서는 분석 플레이트를 Skatron 하베스터에서 50 mM EDTA, 1 mM ATP를 사용하여 두 번의 세척 주기로 세척합니다. 그런 다음 섬광액 (100 μL)을 웰에 첨가하고 마이크로-β-카운터를 사용하여 32P 통합을 측정합니다.
세포 분석:

[3]
  • 세포주

    HT29, SW480, PMCO1, PLC/PRF/5, KYN-2, Li7, HepG2, MCF-7, MDA-MB-468 and BT-474 cell lines

  • 농도

    ~100 μM

  • 배양 시간

    2 days

  • 방법

    Cell viability is determined using an in vitro toxicology assay kit following the manufacturer’s instructions. Cells are seeded in 96-well plates at day 0. Starting at day 1, cells are treated for 2 days with each of a series of increasing concentrations of PP2 (1 μM, 10 μM, and 100 μM). At the end of this period, cell proliferation is evaluated  by mitochondria dehydrogenase in viable cells, leading to formazan formation. This experiment is repeated three times with 10 determinations/tested concentration.
동물 연구:

[3]
  • 동물 모델

    SCID mice inoculated HT29 cells in the spleen

  • 용량

    5 mg/kg/day

  • 투여

    intraperitoneal injection

참조

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/8557675/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/12606029/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/12114449/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21052789/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15285775/

고객 제품 검증

Inhibition of PLCG1 phosphorylation by the silencing of DopEcR, ErGPCR, and Gq and the addition of inhibitors of RTK and Src. 5 µM SU6668 (RTK inhibitor) and 20 µM PP2 (Src inhibitor) were added to the cells for 30 min treatment before the 20E stimulation.

데이터 출처 [ , , J Biol Chem, 2014, 289(19): 13026-41 ]

D&E. Evaluation of fungal association and transcytosis activity in brain endothelial cells after PP2 treatment. *P < 0.05, **P < 0.01

데이터 출처 [ , , CNS Neurosci Ther, 2017, 23(4):291-300 ]

Inmmunofluorescence staining of ZO-1 (green) junctional protein in HMVEC-L and HPAEC cells treated with dasatinib (100 nM), PP2 (10 μM) or vehicle ctrl (0.1% DMSO) for 24 hours. In line with the effects of dasatinib, PP2 disrupted the junctional complex of both micro- and macrovascular EC, as shown by decreased junctional staining of ZO-1 and gaps in the monolayers.

데이터 출처 [ , , Front Physiol, 2018, 9: 537 ]

Sellecks PP2 (AGL 1879) 인용됨 128 출판물

VCP downstream metabolite glycerol-3-phosphate (G3P) inhibits CD8+T cells function in the HCC microenvironment [ Signal Transduct Target Ther, 2025, 10(1):26] PubMed: 39848960
Intrinsic p53 activation restricts gammaherpesvirus driven germinal center B cell expansion during latency establishment [ Nat Commun, 2025, 16(1):951] PubMed: 39843898
TBK1 phagosomal recruitment enhances antifungal immunity via positive feedback regulation with SRC [ Cell Rep, 2025, 44(7):115972] PubMed: 40638388
Activation of integrin signaling up-regulates pro-inflammatory cytokines in JAK2-V617F positive hematopoietic cells [ Cell Commun Signal, 2025, 23(1):368] PubMed: 40790213
Anthrax ET activates Rac1 and RTK signaling to induce F-actin reorganization and endothelial permeability [ iScience, 2025, 28(11):113682] PubMed: 41158867
ICAM-1-mediated Src signaling pathway plays a pivotal role in encephalomyocarditis virus entry [ J Virol, 2025, 99(8):e0071525] PubMed: 40631914
Asiaticoside enhances the anti-tumor effect of anti-PDL1 by regulating T cell activity through increasing LCK activity [ Pathol Res Pract, 2025, 271:155995] PubMed: 40373489
Identification of hypoxic macrophages in glioblastoma with therapeutic potential for vasculature normalization [ Cancer Cell, 2024, S1535-6108(24)00119-3] PubMed: 38640932
Defective N-glycosylation of IL6 induces metastasis and tyrosine kinase inhibitor resistance in lung cancer [ Nat Commun, 2024, 15(1):7885] PubMed: 39251588
Guided monocyte fate to FRβ/CD163+ S1 macrophage antagonises atopic dermatitis via fibroblastic matrices in mouse hypodermis [ Cell Mol Life Sci, 2024, 82(1):14] PubMed: 39720957

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