Purmorphamine

Purmorphamine은 Smo 길항제인 cyclopamine과 경쟁하여 약 1.5 μM의 IC50으로 Smoothened에 직접 결합하고 활성화함으로써 Hedgehog 경로를 활성화합니다. [1]

이 화합물은 다능성 C3H10T1/2 세포에서 골형성의 강력한 유도제입니다. 이 화학물질의 EC50 (ALP 발현 기반)은 C3H10T1/2 세포에서 1 μM입니다. 이 화합물 (1 μM)과 BMP-4 (100 ng/mL)는 3T3-L1 세포에서 ALP 활성을 90배 이상 증가시킵니다. [2]

BMP-4와는 대조적으로, 이 화합물은 다능성 중간엽 전구 세포에서 Hedgehog 신호 전달을 활성화함으로써 골형성을 유도합니다. [3]

Purmorphamine은 쥐의 인간 중간엽 Stem Cells 기반 구성물에서 ALP 발현을 상향 조절합니다. [4]

• 결합 분석

  Smo 결합 분석은 이전에 설명된4,5 바와 같이 BODIPY-cyclopamine 및 Smo 과발현 세포를 사용하여 수행되며, Smo-Myc3, 결실 돌연변이 Smo∆CRD (아미노산 68~182 결실) 및 Smo∆CT (아미노산 556~793 결실)에 대한 CMV 프로모터 기반, SV40 기원 함유 발현 벡터를 사용합니다. HEK 293T 세포는 폴리-D-리신 처리된 유리 커버슬립 위에 12-웰 플레이트에서 70% 밀도까지 배양한 다음, 제조사의 지침에 따라 FuGene 6를 사용하여 적절한 발현 벡터 (0.5 μg/웰)로 형질감염시킵니다

• 세포주

  C3H10T1/2 cell

• 농도

  0.5-10 μM

• 배양 시간

  4 days

• 방법

  C3H10T1/2 cells are expanded in T175 flasks; cells at 13th passage are detached by trypsin/EDTA and diluted in the growth media. The resulting cell suspension is then plated into black clear bottom 384-well plates with 2500 cells/well in 100 µL growth medium using a Multi-drop^TM liquid delivery system. After overnight incubation, cells attached to the bottom of the wells. A stock solution of each Purmorphamine in DMSO (500 nL) is delivered into corresponding well using a Mini Trak^TM multiposition dispenser system to make a final concentration of 5μM of this compound. Cells are then incubated at 37 ℃ with 5% CO₂ in air atmosphere. After 4 days, the medium is removed and 10 µL of passive lysis buffer is added into each well. After 5 min, 10 µL of alkaline phosphatase substrate solution is added to each well. After incubating 15 min at room temperature, the plates are read on an Acquest high-throughput plate reader following the manufacturer's protocol.

• 동물 모델

  Male C57BL/6J mouse pups

• 용량

  10 mg/kg

• 투여

  i.p.