RAF709

카탈로그 번호S8690 배치:S869001

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기술 자료

화학식

C28H29F3N4O4
분자량 542.55 CAS 번호 1628838-42-5
용해도 (25°C)* 시험관 내(In vitro) DMSO 100 mg/mL (184.31 mM)
Ethanol 100 mg/mL (184.31 mM)
Water Insoluble
생체 내(In Vivo) (개별적으로 순서대로 용매를 제품에 첨가하십시오.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution
5%DMSO 40%PEG300 5%Tween80 50%ddH2O

Selleck 연구소에서 검증했습니다. 이 제형에 대한 조정이 필요한 경우 맞춤형 테스트를 위해 당사 영업팀에 문의하십시오.

 5.000mg/ml (9.22mM) Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 100 mg/ml clarified DMSO stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 500 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results. 
Clear solution
5% DMSO 95% Corn oil

Selleck 연구소에서 검증했습니다. 이 제형에 대한 조정이 필요한 경우 맞춤형 테스트를 위해 당사 영업팀에 문의하십시오.

 0.800mg/ml (1.47mM) Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 16 mg/ml clear DMSO stock solution to 950 μL of corn oil and mix evenly. The mixed solution should be used immediately for optimal results. 
* <1 mg/ml은 약간 용해되거나 불용해됨을 의미합니다.
* Selleck은 모든 화합물의 용해도를 자체적으로 테스트하며, 실제 용해도는 게시된 값과 약간 다를 수 있습니다. 이는 정상적인 현상이며, 약간의 배치 간 변동으로 인해 발생합니다.
* 실온 배송 (안정성 테스트 결과 이 제품은 냉각 조치 없이 배송될 수 있음을 보여줍니다.)

원액 준비

생물학적 활성

설명 RAF709는 B-RAF 및 C-RAF에 대해 거의 동등한 0.4 nM의 IC50 값을 가지는 강력한 B/C RAF 키나아제 억제제이며, 높은 수준의 선택성을 보여 1 M에서 BRAF, BRAFV600E 및 CRAF에 99% 이상의 온-타겟 결합을 나타내며, DDR1 (>99%), DDR2 (86%), FRK (92%) 및 PDGFRb (96%)와 같은 오프-타겟은 매우 적습니다. 이들은 1 M에서 80% 이상의 결합을 보이는 유일한 키나아제입니다.
표적
C-Raf
(Cell-free assay)		 BRAF(V600E)
(Cell-free assay)		 B-Raf
(Cell-free assay)
0.4 nM 1 nM 1.5 nM
시험관 내(In vitro)

RAF709는 해리 속도 상수를 측정하기 위해 신속 희석 방법을 사용할 때 매우 느린 해리 동역학(T1/2 > 6.5 h)을 보이는 것으로 나타났습니다. 세포 분석에서 pMEK 및 pERK의 용량 반응은 Calu-6 세포에서 EC50 0.02 및 0.1 M로 측정되었으며, 최소한의 역설적 활성화와 EC50 0.95 M로 증식 억제가 나타났습니다. 이 화합물은 BRAF-CRAF 이량체를 EC50 0.8 M로 안정화시킵니다. 테스트된 456개의 키나아제 중 이 화학 물질은 높은 수준의 선택성을 보여 1 M에서 BRAF, BRAFV600E 및 CRAF에 99% 이상의 온-타겟 결합을 나타내며, DDR1 (>99%), DDR2 (86%), FRK (92%) 및 PDGFRb (96%)와 같은 오프-타겟은 매우 적습니다. 이들은 1 M에서 80% 이상의 결합을 보이는 유일한 키나아제입니다. 이는 RAF 단량체 및 이량체 모두에 대해 동일한 활성을 보입니다. 시험관 내 생화학적 분석에서 이 화합물은 BRAF, BRAFV600E 및 CRAF를 표적으로 하는 강력한 억제 활성을 나타내며 IC50 값은 0.3~1.5 nmol/L 범위입니다. 이 화학적 처리는 HCT116에서 B/CRAF 이종이량체화의 용량 의존적 유도를 유도하지만, MEK 및 ERK 인산화를 억제합니다. 이는 이 화합물이 RAF 이량체를 효과적으로 억제하는 능력과 일치합니다. 이는 BRAF, NRAS 또는 KRAS 돌연변이가 있는 종양 세포에서 최소한의 역설적 활성으로 종양원성 신호 전달 및 증식을 선택적으로 억제합니다.
생체 내(In Vivo)

RAF709는 KRAS 돌연변이 이종이식 모델에서 내약성이 좋고 효과적입니다. 37 에서 3시간 동안 배양 후 종간 플라즈마에서 합리적으로 안정하며 [플라즈마 안정성 (% 잔존): 쥐 85%, 생쥐 82%, 개 95%, 인간 101%], 플라즈마 단백질 결합은 종간 98%로 측정됩니다. 약동학 실험에서 이 화합물은 생쥐 (35 mL/min/kg) 및 개 (14 mL/min/kg)에서 중간 정도의 청소율을 보이며 쥐 (50 mL/min/kg)에서는 높은 청소율을 보입니다. 생쥐 (1 M), 개 (0.5 M), 쥐 (0.5 M)의 Cmax는 약리학적으로 활성 농도에 도달하며, 생쥐 (68%), 쥐 (24%), 개 (48%)에서 허용 가능한 경구 생체이용률이 관찰됩니다. Calu-6 이종이식 누드 마우스 모델에서 이 화학 물질로 치료하면 용량 의존적 항종양 활성이 나타나며, 10 mg/kg은 부분적으로 효과적이었고 (%T/C = 92%), 30 mg/kg은 측정 가능한 항종양 활성을 나타냈으며 (% T/C = 46%), 200 mg/kg은 평균 종양 퇴행이 92%였습니다. 반면 동일한 고용량은 PC3, KRAS WT 모델에서는 효과적이지 않습니다.

프로토콜 (참조)

키나아제 분석:

[1]
  • CRAF 키나아제 분석

    CRAF 키나아제 분석은 10 nM의 키나아제 불활성 MEK1 단백질 기질 (K97R 돌연변이 포함), 3 M ATP, 10 pM CRAF Y340E/Y341E를 사용하여 수행되었습니다. 반응 완충액은 50 mM Tris pH 7.5, 10 mM MgCl2, 0.05% BSA, 50 mM NaCl, 0.01% Tween-20, 1 mM DTT를 포함했습니다. 반응은 흰색 384-웰 플레이트의 10 L 부피에서 실온에서 40분 동안 수행되었으며, 5 L/웰 퀀칭 용액 (50 mM Tris pH 7.5, 50 mM EDTA)을 추가하여 중단되었습니다. 종결된 반응에는 5 L/웰 검출 시약이 투여되었으며, 이는 50 mM Tris pH 7.5, 0.01% Tween-20, 1:1000 희석된 항인산화 MEK1/2 S217/S221 항체, 각각 0.01 mg/mL의 AlphaScreen Protein A 코팅 수용체 비드 및 스트렙타비딘 코팅 공여체 비드로 구성되었습니다. 플레이트는 실온에서 밤새 배양 후 EnVision 플레이트 리더에서 판독되었습니다. 화합물 억제 연구에서 이 화합물은 25 M에서 1.74 × 10−6 M까지의 농도 범위에서 16점, 3배 형식으로 테스트되었습니다. DMSO는 최종 농도 0.5%였습니다. 이 화학 물질은 기질을 추가하여 반응을 시작하기 전에 30분 동안 CRAF와 사전 배양되었습니다. 억제 데이터는 4-매개변수 로지스틱 방정식에 맞춰져 화합물의 IC50을 계산했습니다.
세포 분석:

[2]
  • 세포주

    HCT116 cells

  • 농도

    0.1, 1, 10 μM

  • 배양 시간

    1 hour

  • 방법

    BRAF/CRAF dimerization is assessed by immunoprecipitating BRAF or CRAF, followed by Western blot analysis of BRAF and CRAF. Levels of pMEK and pERK in whole-cell lysates (WCL) are determined by Western blot analysis. GAPDH level is included as a loading control.
동물 연구:

[1]
  • 동물 모델

    Calu-6 model (tumor bearing mice)

  • 용량

    10, 30, or 200 mg/kg

  • 투여

    oral administration

참조

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/28557458/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/29343524/

Sellecks RAF709 인용됨 5 출판물

A structure-based modelling approach identifies effective drug combinations for RAS-mutant acute myeloid leukemia [ bioRxiv, 2025, 2025.04.29.651188] PubMed: 40654850
Tumour-selective activity of RAS-GTP inhibition in pancreatic cancer [ Nature, 2024, 629(8013):927-936] PubMed: 38588697
Identification of a RAS-activating TMEM87A-RASGRF1 fusion in an exceptional responder to sunitinib with non-small cell lung cancer. [ Clin Cancer Res, 2020, 20 pii: clincanres] PubMed: 32312893
KRASQ61H preferentially signals through MAPK in a RAF dimer-dependent manner in non-small cell lung cancer [ Cancer Res, 2020, canres.0448.2020] PubMed: 32605999
Depolarization-Dependent C-Raf Signaling Promotes Hyperexcitability and Reduces Opioid Sensitivity of Isolated Nociceptors after Spinal Cord Injury [ J Neurosci, 2020, 40(34):6522-6535] PubMed: 32690613

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