RKI-1447

카탈로그 번호S7195 배치:S719501

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기술 자료

화학식

C16H14N4O2S
분자량 326.37 CAS 번호 1342278-01-6
용해도 (25°C)* 시험관 내(In vitro) DMSO 65 mg/mL (199.16 mM)
Water Insoluble
Ethanol Insoluble
생체 내(In Vivo) (개별적으로 순서대로 용매를 제품에 첨가하십시오.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Homogeneous suspension
15% Captisol

Selleck 연구소에서 검증했습니다. 이 제형에 대한 조정이 필요한 경우 맞춤형 테스트를 위해 당사 영업팀에 문의하십시오.

 10.000mg/ml (30.64mM) Taking the 1 mL working solution as an example, take 10 mg of this product, add it to 1 ml of 15% Captisol clear solution, and mix evenly to form a uniform suspension. The mixed solution should be used immediately for optimal results. 
Clear solution
5%DMSO 40%PEG300 5%Tween80 50%ddH2O

Selleck 연구소에서 검증했습니다. 이 제형에 대한 조정이 필요한 경우 맞춤형 테스트를 위해 당사 영업팀에 문의하십시오.

 10.000mg/ml (30.64mM) Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 200 mg/ml clarified DMSO stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 500 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results. 
Clear solution
5% DMSO 95% Corn oil

Selleck 연구소에서 검증했습니다. 이 제형에 대한 조정이 필요한 경우 맞춤형 테스트를 위해 당사 영업팀에 문의하십시오.

 0.250mg/ml (0.77mM) Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 5 mg/ml clear DMSO stock solution to 950 μL of corn oil and mix evenly. The mixed solution should be used immediately for optimal results. 
* <1 mg/ml은 약간 용해되거나 불용해됨을 의미합니다.
* Selleck은 모든 화합물의 용해도를 자체적으로 테스트하며, 실제 용해도는 게시된 값과 약간 다를 수 있습니다. 이는 정상적인 현상이며, 약간의 배치 간 변동으로 인해 발생합니다.
* 실온 배송 (안정성 테스트 결과 이 제품은 냉각 조치 없이 배송될 수 있음을 보여줍니다.)

원액 준비

생물학적 활성

설명 RKI-1447은 ROCK1 및 ROCK2의 강력한 억제제로, IC50은 각각 14.5 nM 및 6.2 nM이며, 항침습 및 항종양 활성을 가집니다.
표적
ROCK2
(Cell-free assay)		 ROCK1
(Cell-free assay)
6.2 nM 14.5 nM
시험관 내(In vitro)

RKI-1447은 ATP 결합 부위를 표적으로 하는 강력한 Rho Kinase 억제제로 작용하는 세포 투과성 피리딜티아졸릴-우레아이며, PKA, PKN1/PRK1, p70S6K/RPS6kB1, AKT1, MRCKa/CDC42BPA(이 화합물 1 µM에 의해 각각 85.5%, 80.5%, 61.9%, 56.0%, 50.4% 억제) 또는 15가지 다른 키나아제에 대한 효능은 훨씬 감소합니다. 이 화학물질/ROCK1 복합체의 결정 구조는 이 억제제가 힌지 영역 및 DFG 모티프와의 상호작용을 통해 ATP 결합 부위에 결합하는 Type I 키나아제 억제제임을 보여줍니다. 이 물질은 인간 암세포에서 ROCK 기질인 MLC-2 및 MYPT-1의 인산화를 억제하지만, 10 μM과 같은 고농도에서도 AKT, MEK 및 S6 키나아제의 인산화 수준에는 영향을 미치지 않았습니다. 또한 이 화합물은 LPA 자극 후 ROCK 매개 세포골격 재구성(액틴 스트레스 섬유 형성)을 억제하는 데 매우 선택적이지만, PDGF 및 브라디키닌 자극 후 PAK 매개 라멜리포디아 및 필로포디아 형성에는 영향을 미치지 않습니다. 이는 유방암 세포의 이동, 침윤 및 부착 비의존적 종양 성장을 억제합니다.

생체 내(In Vivo)

RKI-1447은 형질전환 마우스 모델에서 유방 종양의 성장을 억제하는 데 매우 효과적입니다. 이 화합물로 처리된 마우스의 종양은 평균 종양 부피 변화율이 8.8%에 불과하여 크기가 증가했습니다. 따라서 유방 종양 성장을 87% 억제했으며, 평균적으로 이 화학물질로 처리된 마우스의 유방 종양은 비히클 대조군으로 처리된 마우스의 종양에 비해 7.7배 더 작았습니다. 이 화합물 처리는 마우스 체중 감소를 유발하지 않습니다.

프로토콜 (참조)

키나아제 분석:

[2]
  • Z-Lyte FRET 키나아제 분석

    키나아제 억제는 미오신 경쇄 서열 KKRPQRRYSNVF를 기반으로 하는 Ser/Thr 13 펩타이드 기질을 사용한 Invitrogen Z-Lyte® FRET 키나아제 분석법으로 측정됩니다. 이 화합물은 평균 IC50 값을 결정하기 위해 8점 희석을 이중으로 수행하여 3일간 개별적으로 테스트됩니다. 분석 조건은 50mM HEPES (pH 7.5), 10mM MgCl2, 1mM EGTA 및 0.01% Brij-35에 5ng 효소를 포함하는 15μL 키나아제 반응 부피로 최적화됩니다. 반응은 1.5μM 펩타이드 기질과 12.5μM ATP (ROCK1용) 또는 2μM 기질과 50μM ATP (ROCK2용) 존재 하에 실온에서 1시간 동안 배양됩니다.
세포 분석:

[1]
  • 세포주

    MDA-MB-231

  • 농도

    ~600 μM

  • 배양 시간

    72 h

  • 방법

    Cells are plated in a 96 well tissue culture plate (1200 cells per well) and incubated for 24 hours. After incubation the cells are treated with vehicle or increasing concentrations of RKI-1447 for 72 hours. After incubation, freshly prepared MTT (2mg/ml) is added to each well and incubated for 3 hours. After incubation the plates are read at 540 nm.
동물 연구:

[1]
  • 동물 모델

    MMTV/neu transgenic mice [FVB/N-Tg (MMTVneu) 202 Mul/J]

  • 용량

    200 mpk/day

  • 투여

    i.p.

참조

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22846914/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23275831/

고객 제품 검증

(d) ROCK inhibition blocks CC-RCC migration in a transwell assay. RCC10 or 786-O cells were treated with Y-27632, RKI 1447 or DMSO vehicle (as indicated) for 6 h. The assay was performed in duplicate and the experiment was repeated three times. Statistical analysis in (b-d) was performed using a paired t-test comparing each normalized dose to the negative control (*P<0.05, **P<0.01 and ***P<0.001); s.e.m.

데이터 출처 [ , , Oncogene, 2016, 1-10. ]

Western blotting analysis of the indicated proteins in MSC-4H-FC cells treated with increasing concentrations of dasatinib, PF-573228, or RKI-1447 for 24 hours. β-Actin levels were used as loading control.

데이터 출처 [ , , Neoplasia, 2018, 20(1):44-56 ]

The cells were treated with 5 μM of the PAK1-specific inhibitor IPA-3 or 1 μM of the ROCK1/2-specific inhibitor RKI-1447 for 24 h. Total cell lysates were immunoblotted with antibodies against p110β, p110δ, p-PAK1, PAK1, ROCK1, ROCK2, p-LIMK1, LIMK1 or β-actin, which served as an internal control. The results are representative of three independent experiments.

데이터 출처 [ , , Anticancer Res, 2017, 37(4):1805-1818 ]

Sellecks RKI-1447 인용됨 12 출판물

Therapeutic targeting of tumor spheroids in a 3D microphysiological renal cell carcinoma-on-a-chip system [ Neoplasia, 2023, 10.1016/j.neo.2023.100948] PubMed: 37944353
Correlating Basal Gene Expression across Chemical Sensitivity Data to Screen for Novel Synergistic Interactors of HDAC Inhibitors in Pancreatic Carcinoma [ Pharmaceuticals (Basel), 2023, 16(2)294] PubMed: 37259439
Establishment and characterization of immortalized sweat gland myoepithelial cells [ Sci Rep, 2022, 12(1):7] PubMed: 34997030
İnsan kornea endotel hücreleri üzerine farklı RHO kinaz inhibitörlerinin etkinliğinin araştırılması [ GCRIS, 2022, ] PubMed: none
Synapse-specific Lrp4 mRNA enrichment requires Lrp4/MuSK signaling, muscle activity and Wnt non-canonical pathway [ Cell Biosci, 2021, 11(1):105] PubMed: 34090516
RKI-1447 suppresses colorectal carcinoma cell growth via disrupting cellular bioenergetics and mitochondrial dynamics. [ J Cell Physiol, 2020, 235(1):254-266] PubMed: 31237697
A novel human colon signet-ring cell carcinoma organoid line: establishment, characterization and application [ Carcinogenesis, 2020, 41(7):993-1004] PubMed: 31740922
[ Cell Rep, 2019, ] PubMed: 31825822
FUS-CHOP Promotes Invasion in Myxoid Liposarcoma through a SRC/FAK/RHO/ROCK-Dependent Pathway [Tornin J Neoplasia, 2018, 20(1):44-56] PubMed: 29190494
Prominent oncogenic roles of EVI1 in breast carcinoma [Wang H Cancer Res, 2017, 77(8):2148-2160] PubMed: 28209621

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