Ro-3306

RO-3306은 CDK1/cyclin B1, CDK1/cyclin A, CDK2/cyclin E 및 CDK4/cyclin D 활성을 각각 35 nM, 110 nM, 340 nM 및 2000 nM 이상의 Ki 값으로 억제합니다. HCT116, SW480 및 HeLa 세포를 RO-3306으로 20시간 처리하면 G2/M기에서 세포 주기가 완전히 차단됩니다. HCT116과 SW480 모두의 증식은 RO-3306에 의해 효과적으로 차단됩니다. RO-3306은 비종양성 세포(MCF 10A 및 MCF 12A)보다 암세포(HCT116 및 SW480)에서 더 세포자멸사를 유도하는 것으로 나타났습니다.[1]

RO-3306은 10 μM 농도에서 난모세포 성숙을 효과적으로 정지시킵니다.[2]

RO-3306은 ATP 경쟁적이고 선택적인 CDK1 억제제입니다.

• CDK 분석

  CDK1 시클린 B1, CDK1 시클린 A, CDK2 시클린 E 및 CDK4 시클린 D의 활성은 96웰 형식의 균질 시간 분해 형광 분석법으로 측정됩니다. 분석 완충액은 25 mM Hepes, 6.25 mM MgCl2, 0.003% Tween 20, 0.3 mg/mL BSA, 1.5 mM DTT 및 다음과 같은 ATP를 포함했습니다: 162 μM (CDK1), 90 mM (CDK2) 또는 135 μM (CDK4). CDK1 및 CDK2 완충액은 10 mM MgCl2를 포함했습니다. 시험 화합물은 분석 완충액에 최종 농도의 3배로 20 μL로 희석되고, pRB 기질(0.185 μM)을 포함하는 40 μL 분석 완충액을 첨가하여 반응을 시작합니다. 플레이트는 37°C에서 30분 동안 일정한 교반과 함께 배양하고, 15 μL의 1.6 μM 항-인산화 pRB 항체(Ser-780)를 25 mM Hepes, 24 mM EDTA 및 0.2 mg/mL BSA에 첨가하여 반응을 종료합니다. 추가 30분 동안 흔들면서 배양한 후, 15 μL의 3 nM Lance-Eu-W1024-표지된 항-토끼 IgG와 60 nM 알로피코시아닌-접합된 항-His-6 항체를 25 mM Hepes 및 0.5 mg/mL BSA에 첨가하고 1시간 동안 배양합니다. 플레이트는 Victor-V 멀티-라벨 판독기에서 여기 340 nm 및 방출 615 nm 및 665 nm에서 판독됩니다. IC50 값은 665 nm에서의 판독값에서 계산되고 615 nm에서의 유로퓸 판독값에 대해 정규화됩니다. Ki 값은 방정식: Ki= IC50/(1 + S/Km )에 따라 계산되며, 여기서 S는 분석에서 ATP 농도이고 Km은 ATP에 대한 미카엘리스-멘텐 상수입니다. 키나제 패널에 대한 억제 활성은 IMAP 분석 기술로 결정됩니다.

• 세포주

  MDA-MB-231 cell line

• 농도

  20 μM

• 배양 시간

  72 h

• 방법

  Log phases cells (25,000) are seeed in 96-well plates and incubated in a 37℃ incubator with CO2, After 24 h, different concentrations of RO-3306 are administered to determine the drug concentrations required to achieve a 50% growth inhibition (IC50). MTT (20 μL, 5mg/mL stock solution in saline) is added to each well and the cells are incubated for 4 h. Supernatants are removed and formazan crystals from viable cells are solubilized with 200 μL anhydrous DMSO. The absorbance is detected with a 550 model microplate reader at the 565 nm wavelength.

• 동물 모델

  Female BALB/c mice

• 용량

  1.5 mg/kg

• 투여

  i.n.