Ruxolitinib (INCB18424) Phosphate

INCB018424는 Ba/F3 세포와 HEL 세포에서 JAK2V617F 매개 신호 전달 및 증식을 강력하고 선택적으로 억제합니다. INCB018424는 Ba/F3 세포에서 용량 의존적으로 Apoptosis를 현저히 증가시킵니다. INCB018424 (64 nM)는 Ba/F3 세포에서 탈분극된 미토콘드리아를 가진 세포의 두 배 증가를 초래합니다. INCB018424는 정상 기증자와 진성 적혈구증가증 환자의 적혈구 전구세포 증식을 각각 407 nM 및 223 nM의 IC50으로 억제합니다. INCB018424는 67 nM의 IC50으로 적혈구 집락 형성에 대해 놀라운 효능을 나타냅니다. [1]

INCB018424 (180 mg/kg, 경구, 1일 2회)는 JAK2V617F 유발 마우스 모델에서 22일째에 90% 이상의 생존율을 보입니다. INCB018424 (180 mg/kg, 경구, 1일 2회)는 비장 비대와 염증성 사이토카인의 순환 수준을 현저히 감소시키고, 신생물 세포를 우선적으로 제거하여 JAK2V617F 유발 마우스 모델에서 골수억제 또는 면역억제 효과 없이 유의하게 연장된 생존을 가져옵니다. [1] 골수섬유증 이중 맹검 시험에서 Ruxolitinib 그룹 환자의 41.9%가 1차 평가변수에 도달한 반면, 위약 그룹에서는 0.7%에 불과했습니다. Ruxolitinib은 비장 부피 감소를 유지하고 총 증상 점수에서 50% 이상의 개선을 가져옵니다. [2] 골수섬유증 환자에서 Ruxolitinib (15 mg 1일 2회) 그룹 환자의 총 28%가 48주째에 비장 부피가 최소 35% 감소한 반면, 최적의 치료를 받은 그룹에서는 0%였습니다. 평균 촉지 가능한 비장 길이는 Ruxolitinib으로 56% 감소했지만, 48주째 최적의 치료로는 4% 증가했습니다. Ruxolitinib 그룹의 환자들은 전반적인 삶의 질 측정에서 개선을 보였고 골수섬유증과 관련된 증상도 감소했습니다. [3]

• 결합 분석

  재조합 단백질은 Sf21 세포와 바쿨로바이러스 벡터를 사용하여 발현되고 친화성 크로마토그래피로 정제됩니다. JAK 키나아제 분석은 펩타이드 기질(-EQEDEPEGDYFEWLE)을 이용한 균일한 시간 분해 형광 분석을 사용합니다. 각 효소 반응은 Ruxolitinib 또는 대조군, JAK 효소, 500 nM 펩타이드, 아데노신 삼인산(ATP; 1mM) 및 2% 디메틸 설폭사이드(DMSO)를 사용하여 1시간 동안 수행됩니다. 50% 억제 농도(IC50)는 형광 신호의 50% 억제에 필요한 INCB018424 농도로 계산됩니다.

• 세포주

  Ba/F3 and HEL cells

• 농도

  3 μM

• 배양 시간

  48 h

• 방법

  Cells are seeded at 2 × 10³/well of white bottom 96-well plates, treated with INCB018424 from DMSO stocks (0.2% final DMSO concentration), and incubated for 48 hours at 37 ℃ with 5% CO₂. Viability is measured by cellular ATP determination using the Cell-Titer Glo luciferase reagent or viable cell counting. Values are transformed to percent inhibition relative to vehicle control, and IC50 curves are fitted according to nonlinear regression analysis of the data using PRISM GraphPad.

• 동물 모델

  JAK2V617F-driven mouse model

• 용량

  180 mg/kg

• 투여

  o.g.