Salirasib

세포가 없는 시스템에서 메틸전달효소 분석을 위해 랫트 뇌 소뇌의 시냅스막 또는 배양된 세포주의 총막 (100,000 × g 펠릿)을 사용합니다. 메틸전달효소 분석은 37°C에서 50 mM Tris-HCl 완충액, pH 7.4를 사용하여 100 μg의 단백질, 25 μM [메틸-³H]AdoMet (300,000 cpm/nmol), 및 50 μM AFC (DMSO에 스톡 용액으로 준비됨)와 함께 총 50 μL의 부피로 수행됩니다. 모든 분석에서 DMSO 농도는 8%입니다. 이 화합물의 다양한 농도는 텍스트에 표시된 대로 여러 실험에서 사용됩니다. 반응은 10분 후 500 μL의 클로로포름:메탄올 (1:1)을 첨가하고, 이어서 250 μL의 H₂O를 첨가, 혼합 및 상 분리를 통해 종료됩니다. 클로로포름 상의 125 μL 부분은 40°C에서 건조되고, 200 μL의 1 N NaOH, 1% SDS 용액이 첨가됩니다. 이렇게 형성된 메탄올은 증기상 평형 방법으로 계수됩니다. 일반적인 백그라운드 계수 (AFC 미첨가)는 50-100 cpm이며, 이 화학물질을 사용한 일반적인 반응은 500-6,000 cpm을 산출합니다. 분석은 삼중으로 수행되며, 백그라운드 계수는 빼집니다. 내인성 기질의 메틸화 및 겔 전기영동이 수행됩니다. 온전한 세포에서 단백질 카르복실 메틸화는 100 μCi/mL [메틸-³H]메티오닌을 사용하여 결정됩니다. 세포는 5 mL의 표지 배지가 있는 10 cm 플레이트에서 자란 거의 합포체 배양에서 분석됩니다.

PC12, CHE, T-antigen-transformed CHE, endothelial cells, astrocytes, B16, Rat1, EJ, NIH3T3, v-Raf-transformed NIH3T3 cell lines

~100 μM

10 days

Cells are grown in 24-well plates. 2 h after plating, the cells receive either solvent or this compound freshly prepared from a stock solution to yield the final indicated concentrations in 0.1% DMSO. Media are replaced every 4 days with fresh medium containing the solvent or the drug. Separate experiments indicate that the solvent itself has no effect on cell growth. On the indicated days, the cells are detached from plates by trypsin/EDTA and counted under the light microscope. All assays are performed in quadruplicate. In parallel experiments, cells are stained either with trypan blue or with MTT, and the stained cells are examined under the light microscope. In some MTT-stained cultures, the cells are dissolved in 0.2 mL of 100% DMSO, and the extent of staining is determined spectrophotometrically using an enzyme-linked immunosorbent assay reader.

Panc-1 xenografted nude mice

5 mg/kg daily

i.p.