SNS-314

HCT116 대장암 세포주에서, 온전하거나 고갈된 p53 단백질 수준에서, SNS-314 Mesylate는 다른 표준 화학요법제와 순차적으로 투여될 때 향상된 효능을 보이며, 방추사 조립 체크포인트를 활성화하는 약물에 대해 가장 깊은 시너지가 확인됩니다. [2] 최근 연구에 따르면 이 화합물은 HCT116 세포에서 강력한 항증식 활성을 보이며 연성 한천 콜로니 형성을 억제합니다. [3]

24시간 후 SNS-314 Mesylate와 순차적으로 처리하면 HCT116 이종이식편의 종양 성장 억제가 72.5%로 유의미하게 나타나지만, 이 화합물을 단일 제제로 사용하면 HCT116 종양 성장에 유의미한 억제가 나타나지 않습니다. [2] HCT116 인간 결장암 이종이식 모델에서, 이 화학물질을 50 및 100 mg/kg 투여하면 히스톤 H3 인산화의 용량 의존적 억제가 나타나며, 이는 생체 내에서 효과적인 Aurora-B 억제를 나타냅니다. 또한, 이 제제로 치료한 동물에서 얻은 HCT116 종양은 인산화된 히스톤 H3 수준 감소, caspase-3 증가 및 핵 크기 증가를 포함한 강력하고 지속적인 반응을 보입니다. [3]

• Aurora-A Kinase Assay

  이전 설명된 바와 같이, 인간화 마우스 Aurora A (아미노산 107-403)는 E. coli에서 발현됩니다. IC50 분석을 위해, 이 화합물은 DMSO에서 3배 희석되고 분석 버퍼 (10 mM Tris HCl pH 7.2, 10 mM MgCl₂, 0.05% NaN₃, 0.01% Tween-20, 및 0.1% BSA)에 12.5배 희석됩니다. 이 화학물질은 Aurora A 및 FAM-PKAtide를 각각 2 nM 및 50 nM의 최종 농도로 포함하는 분석 버퍼에 4배 희석됩니다. 키나아제 반응은 최종 농도 10 mM의 ATP를 분석 버퍼에 첨가하여 시작되며, 21°C에서 25분 동안 배양됩니다. 양성 대조군으로 이 화합물 대신 DMSO를 첨가하고, 음성 대조군으로 Aurora A 대신 분석 버퍼를 첨가합니다. 두 대조군 반응은 삼중으로 수행됩니다. 인산화된 PKAtide를 검출하기 위해, 키나아제 반응은 Progressive Binding Solution (1:400 Progressive Binding Reagent, 1 × Buffer A, Molecular Devices)과 1:3 비율로 혼합됩니다. 혼합물은 21°C에서 30분 동안 배양되고, 플레이트는 485 nm 여기 및 530 nm 방출로 Analyst AD에서 스캔됩니다. 상대적 효소 활성 백분율은 각 웰의 mP 값을 양성 대조군의 평균으로 정규화하여 계산됩니다. 상대적 효소 활성 값은 화합물 농도의 로그 함수로 플로팅되고, IC50 값은 GraphPad Prism 소프트웨어에서 시그모이드 용량-반응 곡선 맞춤을 사용하여 생성됩니다. IC50

• 세포주

  HCT116 SCR and HCT116 p53 RNAi cells

• 농도

  ~125 nM

• 배양 시간

  48 hours

• 방법

  Viability is measured using the CellTiter-Blue cell viability assay. Cells are treated as described above, although with a 5-day incubation period. Cytotoxicity is determined by measuring intracellular ATP using the CellTiter-Glo Luminescence Cell Viability Assay. Cells are seeded in white 96-well tissue culture plates at a density of 1.5-2 × 10³ cells/well, and a serial dilution of SNS-314 is dosed in combination with fixed concentrations for a total of 72 hours. Viability is determined as the ratio between the ATP in treated cells versus control cells. Apoptosis is measured using the caspase-Glo 3/7 system. Cells are plated in white 96-well plates as described above and treated first with this compound for 24 hours, washed with 200 μL of 1× PBS, and fresh medium is added with the second agent for 24 hours.

• 동물 모델

  HCT116 cells are injected s.c. into the right flank of nu/nu mice.

• 용량

  ≤42.5 mg/kg

• 투여

  Administered via i.p.