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생물학적 설명
| 특이성 | SSEA4 Antibody [E20H6]는 총 SSEA4 단백질의 내인성 수준을 검출합니다. |
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| 배경 | SSEA4 (Stage-Specific Embryonic Antigen 4)는 인간 배아줄기세포(hESC), 유도만능줄기세포(iPSC), 기형종 세포 및 암줄기세포에서 발견되지만, 분화된 체세포 또는 마우스 다능성 세포에서는 없는 시알릴화된 헥사당 글리코리피드 에피토프(Neu5Acα2-3Galβ1-3GalNAcβ1-3Galα1-4Galβ1-4Glc-Cer)입니다. 이 탄수화물 머리 그룹은 MC813 항체에 의해 인식되는 말단 시알산(Neu5Ac) 카르복실산과 Asp54H/Gly53H 및 N-아세틸 GalNAc 하이드록실기와 Asp49L을 포함하는 수소 결합 네트워크를 통해 말굽 모양의 형태를 채택하며, 이는 유세포 분석 및 면역조직화학을 통한 다능성 상태의 특정 검출에 대한 유용성을 뒷받침합니다. 글리칸의 견고한 α-Gal 연결과 β1-3 글리코시드 결합은 혈장막의 세라마이드 지질 꼬리 위에 안정적이고 확장된 형태를 유지하며, 여기서 SSEA4는 LRP6 보조 수용체와의 직접적인 상호작용을 통해 Wnt/β-카테닌 신호 전달을 조절하여 리간드 독립적 경로 활성화를 가능하게 하고, 자가 재생에 필수적인 Nanog/Oct4/Sox2 회로를 유지하는 글리칸 매개 클러스터링을 통해 PI3K/Akt를 모집함으로써 줄기세포성을 적극적으로 지원합니다. 분화 과정에서 글리코실트랜스퍼라제(ST3GAL6, B3GALT5)의 하향 조절은 말단 시알산을 점진적으로 제거하여 SSEA4를 SSEA3으로 전환시키고 신호 전달 능력을 소멸시킵니다. |
사용 정보
| 응용 | IF, FCM | 희석 |
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| 반응성 | Human | ||||||
| 출처 | Mouse Monoclonal Antibody | MW | |||||
| 보관 완충액 | PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 | 보관 (수령일로부터) |
-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years | ||||
| IF |
Experimental Protocol:
Sample Preparation
1. Adherent Cells: Place a clean, sterile coverslip in a culture dish. Once the cells grow to near confluence as a monolayer, remove the coverslip for further use.
2. Suspension Cells: Seed the cells onto a clean, sterile slide coated with poly-L-lysine.
3. Frozen Sections: Allow the slide to thaw at room temperature. Wash it with pure water or PBS for 2 times, 3 minutes each time.
4. Paraffin Sections: Deparaffinization and rehydration. Wash the slide with pure water or PBS for 3 times, 3 minutes each time. Then perform antigen retrieval.
Fixation
1. Fix the cell coverslips/spots or tissue sections at room temperature using a fixative such as 4% paraformaldehyde (4% PFA) for 10-15 minutes.
2. Wash the sample with PBS for 3 times, 3 minutes each time.
Permeabilization
1.Add a detergent such as 0.1–0.3% Triton X-100 to the sample and incubate at room temperature for 10–20 minutes.
(Note: This step is only required for intracellular antigens. For antigens expressed on the cell membrane, this step is unnecessary.)
Wash the sample with PBS for 3 times, 3 minutes each time.
Blocking
Add blocking solution and incubate at room temperature for at least 1 hour. (Common blocking solutions include: serum from the same source as the secondary antibody, BSA, or goat serum.)
Note: Ensure the sample remains moist during and after the blocking step to prevent drying, which can lead to high background.
Immunofluorescence Staining (Day 1)
1. Remove the blocking solution and add the diluted primary antibody.
2. Incubate the sample in a humidified chamber at 4°C overnight.
Immunofluorescence Staining (Day 2)
1. Remove the primary antibody and wash with PBST for 3 times, 5 minutes each time.
2. Add the diluted fluorescent secondary antibody and incubate in the dark at 4°C for 1–2 hours.
3. Remove the secondary antibody and wash with PBST for 3 times, 5 minutes each time.
4. Add diluted DAPI and incubate at room temperature in the dark for 5–10 minutes.
5. Wash with PBST for 3 times, 5 minutes each time.
Mounting
1. Mount the sample with an anti-fade mounting medium.
2. Allow the slide to dry at room temperature overnight in the dark.
3. Store the slide in a slide storage box at 4°C, protected from light.
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참조
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