EPZ-6438 (Tazemetostat)

Tazemetostat (EPZ-6438)은 야생형 또는 SMARCB1 돌연변이 세포에서 전반적인 H3K27Me3 수준을 농도 의존적으로 감소시키고, SMARCB1이 결실된 MRT 세포주에서 32 nM에서 1000 nM 범위의 IC50을 갖는 강력한 항증식 효과를 유도합니다. 이 약물은 신경 분화 및 세포 주기 억제의 유전자 발현을 유도하는 반면, Hedgehog 경로 유전자, MYC 및 EZH2의 발현을 억제합니다. [1] 이 화합물의 항증식 효과는 여러 EZH2 돌연변이 림프종 세포주에서 NSC-9900 또는 Hexadecadrol에 의해 증강됩니다. [2]

s.c. G401 이종이식편을 이식한 SCID 마우스에서 Tazemetostat (EPZ-6438)은 투여 기간 동안 종양 정지를 유도하고 체중에 미치는 영향을 최소화하면서 상당한 종양 성장 지연을 유발합니다. [1]

• 생화학적 방법

  Tazemetostat (EPZ-6438)을 1X assay buffer (20 mM Bicine [pH 7.6], 0.002% Tween-20, 0.005% Bovine Skin Gelatin 및 0.5 mM DTT)에 담긴 40 μL의 5 nM PRC2 (50 μL 내 최종 assay 농도 4 nM)와 함께 30분간 배양합니다. assay buffer 3 H-SAM, 비표지 SAM, 그리고 C-말단 비오틴 (C-말단 아미드-캡슐화 리신에 부착)을 포함하는 히스톤 H3 잔기 21-44를 나타내는 펩타이드로 구성된 기질 혼합물 10 μL를 각 well에 첨가하여 반응을 시작합니다 (두 기질 모두 최종 반응 혼합물에 각 Km 값으로 존재하며, 이 assay 형식은 ‘‘균형 조건’’이라고 합니다). 각 효소에 대해 기질의 최종 농도와 기질 펩타이드의 메틸화 상태가 표시됩니다. 반응은 실온에서 90분간 배양한 후 600 μM의 비표지 SAM 10 μL로 억제한 다음, 384-웰 플래시플레이트로 옮겨 30분 후 세척합니다.

• 세포주

  Mutant cell lines (G401, A204, G402, KYM-1), Wild type cell line (RD, 293, SJCRH30)

• 농도

  ~10 μM

• 배양 시간

  7 days

• 방법

  For the adherent cell line proliferation assays, plating densities for each cell line are determined based on growth curves (measured by ATP content) and density over a 7-d time course. On the day before compound treatment, cells are plated in either 96-well plates in triplicate (for the day 0–7 time course) or 6-well plates (for replating on day 7 for the remainder of the time course). On day 0, cells are either untreated, DMSO-treated, or treated with Tazemetostat (EPZ-6438) starting at 10 µM and decreasing in either threefold or fourfold dilutions. Plates are read on day 0, day 4, and day 7 using Cell Titer Glo, with compound/media being replenished on day 4. On day 7, the six-well plates are trypsinized, centrifuged, and resuspended in fresh media for counting by Vi-Cell. Cells from each treatment are replated at the original density in 96-well plates in triplicate. Cells are allowed to adhere to the plate overnight, and cells are treated as on day 0. On days 7, 11, and 14, plates are read using Cell Titer Glo, with compound/media being replenished on day 11. Averages of triplicates are used to plot proliferation over the time course, and calculate IC50 values. For cell cycle and apoptosis, G401 and RD cells are plated in 15-cm dishes in duplicate at a density of 1 × 10⁶ cells per plate. Cells are incubated with this compound at 1 µM, in a total of 25 mL, over a course of 14 d, with cells being split back to original plating density on day 4, 7, and 11. Cell cycle analysis and TUNEL assay are performed using a Guava flow cytometer, following the manufacturer’s protocol.

• 동물 모델

  SCID mice bearing s.c. G401 xenografts.

• 용량

  ~500 mg/kg

• 투여

  Oral administration