TEPP-46 (ML265)

TEPP-46 (ML265)은 시험관 내에서 AC50 = 92 nM로 PKM2를 강력하게 활성화하며 다른 3가지 피루브산 키나아제 동형효소에 비해 높은 선택성을 보입니다. 이 물질은 PKM2 동형 사량체의 이합체-이합체 경계면에 결합하며, 과바나데이트 처리된 세포의 세포 용해물에서 PKM2를 활성화할 수 있습니다. 이는 인산화티로신 펩타이드 축적을 통해 PKM2 활성을 억제하는 것으로 알려진 조건입니다. 이 화합물은 저산소 조건에서 H1299 세포의 배가 시간을 유의하게 증가시켰으나, 흥미롭게도 정상산소 조건에서는 효과를 보이지 않았습니다[1].

7주 마우스 이종이식 모델(H1299 마우스 이종이식)에서 TEPP-46 (ML265)으로 PKM2를 활성화하면 급성 독성 징후 없이 종양 크기와 발생률이 유의하게 감소했습니다. 이 화합물은 또한 24시간 연구 기간 동안 더 높은 수준으로 지속되는 우수한 혈장 농도를 나타냈으며, 양호한 경구 생체 이용률, 낮은 청소율, 긴 반감기 및 양호한 분포 부피를 보였습니다. [1].

• PKM2 활성 분석

  피루브산 키나아제 활성은 젖산 탈수소효소(LDH)에 의한 피루브산 의존성 NADH의 NAD+ 전환을 모니터링하여 측정됩니다. 간단히, 세포주 실험의 경우, DMSO 또는 TEPP-46 (ML265) 처리 시작 1시간 전에 배지를 신선한 배지로 교체합니다. 또한, 지시된 경우, 세포 용해 10분 전에 100 μM 과바나데이트를 첨가합니다. 세포는 2 mM DTT 및 프로테아제 억제제를 포함하는 RIPA 버퍼로 얼음 위에서 용해시키고 21,000 × g에서 원심분리하여 정화합니다. 상층액 5 μL를 사용하여 피루브산 키나아제 활성을 평가합니다. 피루브산 키나아제 활성은 이후 총 단백질 함량으로 정규화되었습니다.

• 세포주

  H1299 cells

• 농도

  50 μM

• 배양 시간

  1 h

• 방법

  H1299 cells incubated with 50 μM TEPP-46 (ML265) for 1 hour, lysed followed by 2-D electrophoresis, Western blot and PGAM1 antibody staining.

• 동물 모델

  Male Balb/c mice

• 용량

  IV: 1 mg/kg, PO: 10 mg/kg; IP: 10 and 50 mg/kg

• 투여

  IV, IP and PO