CP-690550 (Tofacitinib) Citrate

카탈로그 번호S5001 배치:S500109

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기술 자료

화학식

C16H20N6O.C6H8O7
분자량 504.49 CAS 번호 540737-29-9
용해도 (25°C)* 시험관 내(In vitro) DMSO 100 mg/mL (198.21 mM)
Water Insoluble
Ethanol Insoluble
생체 내(In Vivo) (개별적으로 순서대로 용매를 제품에 첨가하십시오.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml은 약간 용해되거나 불용해됨을 의미합니다.
* Selleck은 모든 화합물의 용해도를 자체적으로 테스트하며, 실제 용해도는 게시된 값과 약간 다를 수 있습니다. 이는 정상적인 현상이며, 약간의 배치 간 변동으로 인해 발생합니다.
* 실온 배송 (안정성 테스트 결과 이 제품은 냉각 조치 없이 배송될 수 있음을 보여줍니다.)

원액 준비

생물학적 활성

설명 Tofacitinib citrate (CP-690550, Tasocitinib)는 JAK3, JAK2 및 JAK1에 대해 각각 1 nM, 20 nM 및 112 nM의 IC50을 갖는 새로운 JAK 억제제입니다. 또한 Anti-infection 활성도 가지고 있습니다.
표적
JAK3
(Cell-free assay)		 JAK2
(Cell-free assay)
1 nM 20 nM
시험관 내(In vitro) 토파시티닙 시트레이트는 IL-2 매개 인간 T 세포 증식 및 IL-15 유도 CD69 발현을 각각 11 nM 및 48 nM의 IC50으로 억제합니다. 토파시티닙 시트레이트는 87 nM의 IC50으로 혼합 림프구 반응을 예방합니다. 인간 야생형 또는 V617F JAK2를 보유한 마우스 인자 의존성 세포 Patersen-에리트로포이에틴 수용체(FDCP-EpoR) 세포의 토파시티닙 시트레이트 처리는 각각 2.1 µM 및 0.25 µM의 IC50으로 세포 증식을 예방합니다. 토파시티닙 시트레이트는 인터루킨-6 유도 STAT1 및 STAT3 인산화를 각각 23 nM 및 77 nM의 IC50으로 억제합니다. 또한, 토파시티닙 시트레이트는 JAK2VV617F를 운반하는 마우스 FDCP-EpoR 세포에 유의미한 친-아폽토시스 효과를 생성하는 반면, 야생형 JAK2를 운반하는 세포에서는 더 적은 효과가 관찰됩니다. 이 활동은 주요 JAK2V617F 의존성 하류 신호 전달 인자 신호 변환기 및 전사 활성기 (STAT)3, STAT5 및 v-akt 마우스 흉선종 바이러스 종양 유전자 동족체 (AKT)의 인산화 억제와 관련이 있습니다. 또한, 토파시티닙 시트레이트는 인간 및 게잡이원숭이 NK 및 CD8+ T 세포에서 시험관 내 IL-15 유도 CD69 발현을 예방합니다.
생체 내(In Vivo) Tofacitinib citrate는 생쥐 모델에서 지연형 과민 반응을 감소시키고 심장 동종이식 생존을 연장했습니다. 또한, JAK2V617F 양성 PV 환자의 시험관 내 확장된 적혈구 전구체를 Tofacitinib citrate로 처리하면 특이적인 항증식(IC50 = 0.2 μM) 및 세포자멸사 유도 활성을 나타냅니다. 대조적으로, 건강한 대조군의 확장된 전구체는 증식(IC50 > 1.0 μM) 및 세포자멸사 분석에서 Tofacitinib citrate에 덜 민감합니다. 10 및 30 mg/kg/일 용량의 Tofacitinib citrate를 2주 동안 투여하는 동안, 차량 처리와 비교하여 NK 세포 수의 유의미한 시간 의존적 감소가 관찰되었습니다. Tofacitinib citrate 처리 그룹의 이펙터 메모리 CD8+ 세포 수는 차량으로 처리된 동물에서 관찰된 것보다 55% 적었습니다.

프로토콜 (참조)

키나아제 분석:

[1]
  • 효소 분석

    JAK1, JAK2 및 JAK3 키나아제 분석은 바큘로바이러스에 감염된 SF9 세포에서 발현된 단백질(GST와 인간 JAK 효소의 촉매 도메인 융합 단백질)을 글루타치온-세파로스(Sepharose)를 이용한 친화성 크로마토그래피로 정제하여 사용합니다. 반응 기질은 폴리글루탐산-티로신 [PGT (4:1)]이며, 100 μg/mL 농도로 Nunc Maxi Sorp 플레이트에 37 °C에서 밤새 코팅합니다. 플레이트를 세 번 세척하고, 키나아제 완충액(50 mM HEPES, pH 7.3, 125 mM NaCl, 24 mM MgCl2) + ATP + 1 mM 오르토바나듐산나트륨) 100 μL가 들어 있는 웰에 JAK 효소를 첨가합니다. CP-690550 (Tofacitinib) Citrate의 경우, 또한 다른 농도로 키나아제 분석을 위해 첨가됩니다. 실온에서 30분간 배양한 후, 플레이트를 세 번 세척합니다. 주어진 웰의 인산화된 티로신 수준은 항-포스포티로신 항체를 이용한 표준 ELISA 분석으로 결정됩니다.
세포 분석:

[2]
  • 세포주

    FDCP-EpoR JAK2WT and JAK2V617F cell lines

  • 농도

    0-4 μM

  • 배양 시간

    72 hours

  • 방법

    Determination of growth inhibition by Tofacitinib citrate is performed using identical culture conditions for both FDCP-EpoR JAK2WT and JAK2V617F cell lines. Briefly, 1 × 105 cells/mL are cultured in 96-well flat-bottom plates at 37 °C in a humidified 5% CO2 atmosphere using RPMI 1640 supplemented with 1.25% FCS, and 5% WEHI supernatant. Decreased FCS concentration is necessary to prevent binding between Tofacitinib citrate and serum proteins. Growth inhibition assays are terminated by addition of 20 μL CellTiter96 One Solution Reagent. Flat-bottom plates are incubated for an additional 3 hours for MTT assay. Absorbance is determined at 595 nm on a BioTek Synergy-HT microplate reader. Results are the average standard deviation of three independent determinations.
동물 연구:

[2]
  • 동물 모델

    Mauritius-origin adult cynomolgus monkeys

  • 용량

    10, 30 mg/kg/d

  • 투여

    Oral gavage

참조

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21105711/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18482053/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15371489/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/14593182/

고객 제품 검증

<p>CP-690550 reduced the severity of ischemic damage. (A) CP-690550 (10 μM) suppressed IL-17 production by cdT cells and activated memory T cells. cdT cells and CD4+ CD44+ memory T cells isolated from C5BL6J mice through flow cytometry were stimulated for 24 h with plate-bound monoclonal antibodies to CD3 (2 ng/ml) and CD28 (1 ng/ml) in the presence or absence of IL-23 (25 ng/ml). IL-17A production and IL-17A expression level were measured by quantitative RT-PCR (a) and ELISA (b). (B) CBF reduction after brain ischemia. (C) Time-dependent changes in neurological score. *p < 0.05. (D) Infarct volume as visualized through TTC staining on day 3 in CP-690550 (CP)- and vehicle-treated mice.</p><div><div> </div></div><p> </p>

데이터 출처 [ Biochem Biophy Res Commun , 2010 , 402, 500–506 ]

<p>CP690,550 is effective in treating collagen-induced arthritis in vivo. 6-week-old DBA/J1 male mice were given an initial injection of type 2 collagen on day 21 and arthritis was induced with a second injection on day 0. Vehicle or CP690,550 (15mg/kg/day) was administered interperitoneally once daily for 2 weeks from day 0 (n = 4 per group). Tissue specimens from the ankle of CIA mice administered vehicle or CP690,550 were stained with safranin O and methyl green. Bar, 100 μM. Representatives of at least two independent experiments are shown.</p>

, , Dr. Akihiko Yoshimura of Akihiko Yoshimura

<p>STAT3-inhibition antagonizes arthritis effects in vivo. (A) 6-week-old DBA/J1 male mice were given initial injection of type 2 collagen on day -21, and arthritis was induced with a second injection on day 0. Vehicle or CP690,550 (15mg/kg/day) was administered intraperitoneally once daily for 2 weeks from day 7 (n = 4per group). Arthritis scores were measured three times a week. (B) Total RNA was prepared from the tissue of hind paws of CIA induced mice after 2 weeks of treatment by vehicle or CP690,550, and expression of IL-6 cytokine families (IL-6, OSM, IL-11 and LIF) relative to β-actin was analyzed by a quantitative real-time PCR. (C) IL 6 serum levels in sera of CIA induced mice after 2 weeks of treatment by vehicle or CP690,550 were assessed by ELISA. (D) Specimens of ankle joints from CIA mice treated with vehicle or CP690,550 for 2 weeks were subjected to immunofluorescence staining for pSTAT3. Nuclei were visualized by TOTO3. Bar, 100 μm. (E) Whole cell lysates were made from ankle joint tissues of CIA mice treated with or without CP690,550 for 2 weeks. Phosphorylated-STAT3 was then analyzed by western blot (upper panel) and ELISA (lower panel). Results are representative of at least three independent experiments.</p>

, , Saraswati Sukumar of Johns Hopkins University School of Medicine

<p>The STAT3 inhibitor CP690,550 inhibits arthritis in vivo and the expression of IL-6 cytokine family in vitro. (A) Whole-cell lysates from MC3T3-E1 cells stimulated with IL-1β (10 ng/ml) plus CP690,550 at the indicated concentrations were analyzed by immunoblotting to detect pSTAT3 and STAT3. Actin served as an internal control. (B) 6-week-old DBA/1 male mice were given an initial injection of type 2 collagen on day -21, and arthritis was induced with a second injection on day 0. Vehicle or CP690,550 (15 mg/kg/day) was administered intraperitoneally once daily for 2 weeks from day 0 (n = 4 per group). Arthritis scores were measured three times a week. (C and D) Total RNA was prepared from primary osteoblasts treated with IL-1β (10ng/ml), TNFα (10 ng/ml) or OSM (50 ng/ml) with (+) or without (-) CP690,550 (100nM) for 24 hours, and IL-6 expression relative to β-actin was analyzed by quantitative real-time PCR. Data are means ±SD of IL-6/β-actin. (*P < 0.001; n = 3). (E) IL-6 protein levels in the supernatant of osteoblasts treated with IL-1β (left panel) or TNF (right panel) plus indicated concentrations of CP690,550 for 24 hours were assessed by ELISA. Data are means ±SD of IL-6 (pg/ml).</p>

, , Dr. Akihiko Yoshimura of Akihiko Yoshimura

Sellecks CP-690550 (Tofacitinib) Citrate 인용됨 198 출판물

Unveiling the Anti-Angiogenic Potential of Small-Molecule (Kinase) Inhibitors for Application in Rheumatoid Arthritis [ Cells, 2025, 14(2)102] PubMed: 39851530
Pharmacological evaluation of drug therapies in Aicardi-Goutières syndrome: insights from patient-derived neural stem cells [ Front Pharmacol, 2025, 16:1549183] PubMed: 40183101
JAK/STAT3 represents a therapeutic target for colorectal cancer patients with stromal-rich tumors [ J Exp Clin Cancer Res, 2024, 43(1):64] PubMed: 38424636
Patient-derived rhabdomyosarcoma cells recapitulate the genetic and transcriptomic landscapes of primary tumors [ iScience, 2024, 27(10):110862] PubMed: 39319271
A panel of janus kinase inhibitors identified with anti-inflammatory effects protect mice from lethal influenza virus infection [ Antimicrob Agents Chemother, 2024, 68(4):e0135023.] PubMed: 38470034
Tofacitinib to prevent anti-drug antibody formation against LMB-100 immunotoxin in patients with advanced mesothelin-expressing cancers [ Front Oncol, 2024, 14:1386190] PubMed: 38706610
Metabolic signature and proteasome activity controls synovial migration of CDC42hiCD14+ cells in rheumatoid arthritis [ Front Immunol, 2023, 14:1187093] PubMed: 37662900
Comprehensive protocols for culturing and molecular biological analysis of IBD patient-derived colon epithelial organoids [ Front Immunol, 2023, 14:1097383] PubMed: 36911731
In vitro and in vivo modelling of mutant JAK3/STAT5 signaling in leukemia [ Heliyon, 2023, 9(11):e22085] PubMed: 38053908
Cap analysis of gene expression (CAGE) 法を用いた nestin-induced Ikk2 deficient マウスにおける皮膚炎の分子病態解析 [ University of Toyama Graduate School of Medical and Pharmaceutical Education (Doctoral Course), 2023, ] PubMed: none

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