Dubermatinib(TP-0903)

췌장암 세포(PSN-1)에서 Dubermatinib (TP-0903)은 6 M의 IC50으로 강력한 항증식 활성을 나타냅니다. 또한 Aurora A와 B를 강력하게 억제하여 강력한 G2/M기 정지를 유도합니다. [1] CLL 환자들의 CLL B 세포에서 이 화합물은 인산화된 Axl을 표적으로 하여 용량 의존적인 대량 apoptosis를 유도하고, CLL BMSC 매개 CLL B 세포의 apoptosis 방어 기전을 극복합니다. [2]

성인 쥐의 해마에서 Dubermatinib (TP-0903) (2.5 nM)의 뇌실내 투여는 새로 생성된 세포의 수를 유의하게 증가시키고 해마 세포의 생존을 연장합니다. [3] 쥐에서 이 화합물 (20 μg/g, i.p.)은 GC 유발 신생아 소뇌 발달 이상을 효과적으로 예방합니다. [4]

• Axl 키나아제 활성 분석

  테스트 화합물은 키나아제 반응 완충액(50mM HEPES pH 7.5, 10mM MgCl², 1mM EGTA, 2mM DTT, 0.01% v/v Tween-20)에 원하는 농도로 희석한 후 Axl 키나아제와 짧게 배양한다. 사용된 Axl 키나아제는 히스티딘 태그가 있는 재조합 인간 Axl 키나아제(촉매 도메인, 아미노산 473-894)이다. 반응은 ATP와 표지된 poly-GT 기질(poly Glu:Tyr, 4:1 중합체)을 첨가하여 시작된다. 분석에 사용된 다양한 구성 요소의 농도(반응 부피 10 µL)는 다음과 같다: 1% DMSO, 93 ng/mL Axl 키나아제, 20 µM ATP, 200 nM poly-GT 기질. ATP와 poly-GT 기질을 첨가한 후, 상온에서 60분간 배양하고, 효소 반응은 EDTA 함유 완충액에 터븀 표지된 항인산화티로신 PY20 항체 10 µL를 첨가하여 중지된다. 반응에 첨가된 EDTA와 항체의 최종 농도는 각각 10 mM과 2 nM이다. 터븀 접합 항체는 기질이 인산화될 때 분자(poly-GT 기질에 결합된)와 시간 분해 FRET 신호를 생성한다. 상온에서 1시간 배양 후, EnVision 마이크로플레이트 리더에서 320 nm 여기와 495 nm 및 520 nm 이중 방출로 형광을 측정한다. 신호는 TR-FRET 비율(520 nm 대 495 nm 형광 강도)로 표현된다.

• 세포주

  PSN-1 cells

• 농도

  --

• 배양 시간

  96 hours

• 방법

  For cell proliferation assays with Dubermatinib(TP-0903), 45 µL containing 1000 cells per well are seeded into solid white 384-well plates in appropriate cell growth media containing 10% FBS and incubated overnight at 37 °C and 5% CO₂. The following day, this compound is diluted in serum free growth media to 10x desired concentrations and 5 µL is added to each well. Combined compound and cells are incubated for 96 hours. Following incubation, 40 µL of ATP-Lite solution is added to each well, incubated for an additional 10 minutes at room temperature and luminescence is measured on an EnVision microplate reader. Percent cell viability for it is calculated by comparing treated wells to appropriate controls (e.g. vehicle treated) included on each plate.