TPCA-1

시간 분해 형광 공명 에너지 전달 분석에서 TPCA-1은 17.9 nM의 IC50으로 인간 IKK-2 활성을 억제합니다. 또한, 이 화합물은 ATP 경쟁적임이 입증되었습니다. 이외에도 IKK-1 및 JNK3에 대해 각각 400 nM 및 3600 nM의 IC50 값을 나타냅니다. 이 화학 물질은 TNF-α, IL-6 및 IL-8의 생성을 농도 의존적으로 억제하며, 각각 170, 290 및 320 nM의 IC50 값을 나타냅니다. [1] 이는 신경교종 세포 증식뿐만 아니라 TNF 유도 RelA (p65) 핵 전위 및 NFκB 의존적 IL8 유전자 발현을 억제합니다. 중요하게도, 이 화합물은 IFN 유도 유전자 발현을 억제하여 MX1 및 GBP1 유전자 발현을 완전히 억제하는 반면, ISG15 발현에는 미미한 영향만 미칩니다. [2]

TPCA-1을 3, 10 또는 20 mg/kg, i.p., 하루 두 번(b.i.d.) 예방적으로 투여하면 마우스 콜라겐 유발 관절염(CIA)의 심각도가 용량 의존적으로 감소합니다. 이 화합물을 10 mg/kg, i.p., 하루 두 번(b.i.d.) 투여하여 나타나는 질병 심각도의 유의미한 감소 및 질병 발병 지연은 항류마티스 약물을 격일로 i.p. 투여한 효과와 유사합니다. p65의 핵 내 이동 및 IL-1beta, IL-6, TNF-alpha, 인터페론-감마 수치는 이 화합물로 치료한 마우스의 발 조직에서 유의미하게 감소했습니다. 또한, 이 화학 물질의 생체 내 투여는 시험관 내에서 콜라겐 유발 T 세포 증식을 유의미하게 감소시킵니다. 이 화합물을 20 mg/kg로 치료적으로 투여했지만, 3 또는 10 mg/kg, i.p., 하루 두 번(b.i.d.)으로는 CIA의 심각도를 유의미하게 감소시키지 못했습니다. [1]

• IKK-2 분석

  재조합 인간 IKK-2(잔기 1-756)는 N-말단 GST-태그 융합 단백질로 바큘로바이러스에서 발현되며, 그 활성은 시간 분해 형광 공명 에너지 전달 분석법을 사용하여 평가됩니다. 간략하게, 분석 버퍼(50mM HEPES, 10mM MgCl₂, 1mM CHAPS, pH 7.4, 1mM DTT 및 0.01% w/v BSA 포함)에 희석된 IKK-2(최종 5nM)를 이 화합물의 다양한 농도 또는 DMSO 비히클(최종 3%)이 포함된 웰에 첨가합니다. GST-IκBα 기질(최종 25nM)/ATP(최종 1μM)를 총 30μL의 부피로 첨가하여 반응을 시작합니다. 반응은 실온에서 30분 동안 배양한 다음, 15μL의 50mM EDTA를 첨가하여 종료합니다. W-1024 유로피움 킬레이트로 표지된 항인산세린-IκBα-32/36 단클론 항체 12C2와 알로피코시아닌으로 표지된 항-GST 항체를 포함하는 버퍼(100mM HEPES, pH 7.4, 150mM NaCl 및 0.1% w/v BSA)에 검출 시약(15μL)을 첨가하고, 반응은 실온에서 60분 더 배양합니다. GST-IκBα의 인산화 정도는 Packard Discovery 플레이트 리더를 사용하여 특정 665nm 에너지 전달 신호 대 참조 유로피움 620nm 신호의 비율로 측정됩니다.

• 세포주

  U87, MT330, SJ-G2, and GBM6 human glioma lines

• 농도

  0-50 μM

• 배양 시간

  3 days

• 방법

  Ten microliters of MTT from stock solution (10 mg/mL) is added to each well of 96-well plates containing glioma cells and incubated at 37 °C for 2–4 h. Oxidized MTT is solubilized by adding 100 μL of 10% sodium dodecyl sulfate (SDS) in 0.01 N HCL, and plates are incubated at 37 °C for 4 h in a humidified chamber. Plates are read at 570 nm on a plate reader.

• 동물 모델

  Murine collagen-induced arthritis

• 용량

  3, 10, or 20 mg/kg

• 투여

  Administered via i.p. or b.i.d.