Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution
5%DMSO
Corn oil
Selleck 연구소에서 검증했습니다. 이 제형에 대한 조정이 필요한 경우 맞춤형 테스트를 위해 당사 영업팀에 문의하십시오.
5.000mg/ml
(9.81mM)
Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 100 mg/ml clear DMSO stock solution to 950 μL of corn oil and mix evenly. The mixed solution should be used immediately for optimal results.
* <1 mg/ml은 약간 용해되거나 불용해됨을 의미합니다. * Selleck은 모든 화합물의 용해도를 자체적으로 테스트하며, 실제 용해도는 게시된 값과 약간 다를 수 있습니다. 이는 정상적인 현상이며, 약간의 배치 간 변동으로 인해 발생합니다. * 실온 배송 (안정성 테스트 결과 이 제품은 냉각 조치 없이 배송될 수 있음을 보여줍니다.)
원액 준비
생물학적 활성
설명
UNC0638은 IC50이 각각 <15 nM 및 19 nM인 G9a 및 GLP 히스톤 메틸전이효소를 위한 강력하고 선택적이며 세포 투과성 화학 프로브이며, 광범위한 후성유전학적 및 비후성유전학적 표적에 대한 선택성을 보여줍니다. 이 화합물은 항바이러스 활성을 가지고 있습니다.
표적
G9a (Cell-free assay)
GLP (Cell-free assay)
<15 nM
19 nM
시험관 내(In vitro)
UNC0638은 G9a 및 GLP에 대한 강력하고 선택적이며 세포 침투성 화학 프로브로, BIX01294의 경우 <6과 비교하여 독성/기능 비율이 >100입니다. 이 화합물은 광범위한 후성유전학적 및 비후성유전학적 표적에 대해 G9a 및 GLP의 선택적 억제제입니다. SET7/9 (H3K4 HMTase), SET8 (H4K20 HMTase), PRMT3 및 SUV39H2에 대해 10,000배 이상 선택적입니다. MDA-MB-231 세포에서 이 화학 물질(48시간 노출)은 81 nM의 IC50으로 농도 의존적으로 H3K9me2 수준을 감소시킵니다. 다양한 세포주에 대한 처리는 G9a 및 GLP의 작은 헤어핀 RNA 녹다운에서 관찰된 수준과 동일하게 전체 H3K9me2 수준을 낮추며, 이 화합물의 기능적 효능은 독성으로부터 잘 분리되어 있습니다. MCF7 세포의 클론 형성 능력을 현저히 감소시키고, 알려진 G9a 조절 내인성 유전자의 프로모터에서 H3K9me2 표지의 풍부도를 감소시키며, 마이크로RNA를 인코딩하는 여러 유전체 loci에 불균형적으로 영향을 미쳤습니다. 생쥐 배아 줄기세포에서 이 프로브는 분화를 촉진하지 않고 농도 의존적으로 G9a 침묵 유전자와 레트로바이러스 리포터 유전자를 재활성화합니다.
생체 내(In Vivo)
생쥐 약물 대사 및 약동학 연구에서 UNC0638은 정맥, 경구 또는 복강내 투여 후 높은 청소율, 짧은 반감기, 높은 분포량 및 낮은 노출을 보였습니다. 따라서 이 화합물은 낮은 노출 수준으로 인해 생체 내 동물 연구에 적합하지 않을 수 있지만, 세포 분석 조건에서 높은 안정성, 높은 효능 및 선택성과 결합하여 세포 기반 연구에 이상적인 화학 도구입니다.
이 분석은 SAHH를 사용하여 메틸전이 생성물 S-아데노실호모시스테인을 호모시스테인과 아데노신으로 가수분해하며, 아데노신 탈아민화효소는 아데노신을 이노신으로 전환합니다. 호모시스테인 농도는 그 자유 설프하이드릴 부분을 티올-감응성 형광체인 ThioGlo에 접합함으로써 결정됩니다. IC50 결정을 위해, 분석 혼합물은 25mM 인산칼륨 완충액 pH 7.5, 1mM EDTA, 2mM MgCl2, 0.01% Triton X 100에 5 M SAHH, 0.3 U/mL 아데노신 탈아민화효소, 25 M SAM 및 15 M ThioGlo를 사용하여 준비됩니다. G9a, EHMT1, SETD7, SETD8, PRMT3 및 SUV39H2는 각각 25nM, 100nM, 200nM, 250nM, 1 M 및 100nM에서 분석됩니다. UNC0638은 4nM에서 16 M 범위의 농도로 첨가됩니다. 2분 인큐베이션 후, 히스톤 펩타이드 첨가로 반응이 시작됩니다: G9a의 경우 10 M H3(1-25), EHMT1의 경우 20 M H3(1-25), SETD7의 경우 100 M H3(1-25), SETD8의 경우 500 M H4(1-24), PRMT3의 경우 10 M H4(1-24) 및 SUV39H2의 경우 200 M H3K9Me1 (1-15). 메틸화 반응은 384웰 플레이트 형식으로 20분 동안 360/40 nm 여기 필터와 528/20 nm 방출 필터를 갖춘 Biotek Synergy2 플레이트 리더를 사용하여 형광 증가를 모니터링하여 추적됩니다. 활성 값은 펩타이드 또는 단백질로 인한 배경을 빼서 보정됩니다. IC50 값은 Sigmaplot을 사용하여 계산됩니다. 표준 편차는 두 개의 독립적인 실험에서 계산됩니다.
Approximately 5×105 cells were plated onto 75 cm2 flasks. MCF7 and U2OS cells were grown in Minimal Essential Media (MEM) without phenol red supplemented with Earl's salts, 10% FBS, 1 mM Pyruvate, 2 mM Glutamine, and 1×non-essential amino acids. H1299 cells were grown in Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM) with phenol red supplemented with 10% FBS and 1×Anti-Anti. At the time of cell plating, media was supplemented with 3 μM UNC638A or the equivalent DMSO vehicle. The media with 3 μM this compound but without any cells was also used as a control. All flasks were incubated at 37℃/5% CO2. After 65 hours, media was collected from the cells and centrifuged to remove any cell debris. The media (10 to 15 mL) from each of study groups was mixed with HPLC grade chloroform (7 to 12 mL). After the mixture was gently shaken, it was allowed to sit until the organic layer and the aqueous layer separated. The organic layer was collected, dried over anhydrous Na2SO4, and concentrated in vacuo. The resulting residue was dissolved in 100 μL of methanol and the solution was analyzed using an Agilent 6110 LC/MS Series system with UV detector set to at 254 nm. Samples were injected (10 μL) onto a Phenomenex Kinetex 2.1 x 100 nm, 2.6 μM, C18 column at room temperature and eluted with 72% B (MeCN) with A being H2O + 0.1% formic acid. The flow rate was 0.3 mL/min. No degradation products of this chemical were observed for any of treatment groups.
Coordinated repression of totipotency-associated gene loci by histone methyltransferase EHMT2 through binding to LINE-1 regulatory elements
[ bioRxiv, 2024, 2024.12.18.629181]
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