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생물학적 설명
| 특이성 | UNC5B Antibody [H5N21]는 총 UNC5B 단백질의 내인성 수준을 검출합니다. |
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| 배경 | UNC5B는 축삭 유도 및 혈관 발달 중 네트린-1 매개 반발에 관여하는 UNC5 계열의 의존성 수용체로, 두 개의 세포외 Ig 유사 도메인(Ig1–2)과 네트린-1 결합을 매개하는 두 개의 트롬보스폰딘 유형 1 반복(TSP1)으로 특징지어지며, 이 과정은 헤파란 황산염에 의해 더욱 강화됩니다. UNC5B는 단일 막관통 나선과 ZU5, UPA 및 데스 도메인(DD)을 포함하는 세포질 영역을 가지고 있으며, 카스파제-3은 DLVD↓N(Asp931)에서 절단하여 전사멸세포성 세포내 도메인(ICD)을 방출하고, UPA의 Phe601과 같은 잔기는 자가억제된 닫힌 형태를 안정화시킵니다. 네트린-1이 없는 경우, UNC5B 호모다이머는 DD가 Ser308에서의 탈인산화 후 DAPK1을 모집하는 열린 세포질 상태를 채택하여 키나아제를 활성화하고 p53/Bax/카스파제-9 의존성 세포사멸을 자극합니다. 동시에 UNC5B-DCC 헤테로다이머는 DCC의 P1 도메인을 노출시켜 Rac1/Cdc42 억제 및 PAK/LIMK/코필린 매개 F-액틴 돌출부 붕괴를 통한 반발 신호를 유도하여 과도한 축삭 또는 혈관 팁 세포 필로포디아를 제거합니다. 네트린-1 결합 시, 닫힌 ZU5-UPA 상호작용이 안정화되어 DAPK1 접근을 차단하고 신호를 친혈관형성 PI3K/Akt 생존 경로로 전환하며 지속적인 반발 세포골격 조절이 이루어집니다. 주로 내피 및 신경 조직에서 발현되는 UNC5B 매개 가지치기는 중추 및 말초 신경계 회로 미세조정과 혈관 패턴 형성에 필수적이며, 스플라이스 이소폼 UNC5B-Δ8 (NOVA2 매개 엑손 8 스키핑에 의해 생성됨)은 팁 세포 경쟁을 보장하기 위해 구성적이고 네트린-1에 둔감한 세포사멸을 촉진합니다. 결장직장암에서 흔히 발생하는 UNC5B의 후성유전학적 침묵 또는 발암성 돌연변이는 반발과 생존 사이의 균형을 방해하여 종양 혈관신생, 전이 및 불량한 예후를 부추깁니다. |
사용 정보
| 응용 | IF | 희석 |
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| 반응성 | Human | ||||
| 출처 | Mouse Monoclonal Antibody | MW | |||
| 보관 완충액 | PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 | 보관 (수령일로부터) |
-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years | ||
| IF |
Experimental Protocol:
Sample Preparation
1. Adherent Cells: Place a clean, sterile coverslip in a culture dish. Once the cells grow to near confluence as a monolayer, remove the coverslip for further use.
2. Suspension Cells: Seed the cells onto a clean, sterile slide coated with poly-L-lysine.
3. Frozen Sections: Allow the slide to thaw at room temperature. Wash it with pure water or PBS for 2 times, 3 minutes each time.
4. Paraffin Sections: Deparaffinization and rehydration. Wash the slide with pure water or PBS for 3 times, 3 minutes each time. Then perform antigen retrieval.
Fixation
1. Fix the cell coverslips/spots or tissue sections at room temperature using a fixative such as 4% paraformaldehyde (4% PFA) for 10-15 minutes.
2. Wash the sample with PBS for 3 times, 3 minutes each time.
Permeabilization
1.Add a detergent such as 0.1–0.3% Triton X-100 to the sample and incubate at room temperature for 10–20 minutes.
(Note: This step is only required for intracellular antigens. For antigens expressed on the cell membrane, this step is unnecessary.)
Wash the sample with PBS for 3 times, 3 minutes each time.
Blocking
Add blocking solution and incubate at room temperature for at least 1 hour. (Common blocking solutions include: serum from the same source as the secondary antibody, BSA, or goat serum.)
Note: Ensure the sample remains moist during and after the blocking step to prevent drying, which can lead to high background.
Immunofluorescence Staining (Day 1)
1. Remove the blocking solution and add the diluted primary antibody.
2. Incubate the sample in a humidified chamber at 4°C overnight.
Immunofluorescence Staining (Day 2)
1. Remove the primary antibody and wash with PBST for 3 times, 5 minutes each time.
2. Add the diluted fluorescent secondary antibody and incubate in the dark at 4°C for 1–2 hours.
3. Remove the secondary antibody and wash with PBST for 3 times, 5 minutes each time.
4. Add diluted DAPI and incubate at room temperature in the dark for 5–10 minutes.
5. Wash with PBST for 3 times, 5 minutes each time.
Mounting
1. Mount the sample with an anti-fade mounting medium.
2. Allow the slide to dry at room temperature overnight in the dark.
3. Store the slide in a slide storage box at 4°C, protected from light.
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참조
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