Volasertib (BI6727)

BI2536과 마찬가지로 BI6727은 디하이드로프테리디논 계열 화합물에 속하는 ATP 경쟁적 키나아제 억제제입니다. Plk1 외에도 이 화합물은 밀접하게 관련된 두 키나아제인 Plk2와 Plk3를 각각 5 nM 및 56 nM의 IC50으로 강력하게 억제합니다. 이 화학 물질은 최대 10 μM 농도에서 50개 이상의 다른 키나아제 패널에 대해 억제 활성을 나타내지 않습니다. 이 물질은 HCT116, NCI-H460, BRO, GRANTA-519, HL-60, THP-1 및 Raji 세포를 포함한 다양한 암 조직에서 유래한 여러 세포주의 증식을 EC50이 각각 23 nM, 21 nM, 11 nM, 15 nM, 32 nM, 36 nM 및 37 nM로 억제합니다. NCI-H460 세포에서 이 화합물 처리(100 nM)는 단극 방추체와 히스톤 H3 인산화 세린 10에 대한 양성 염색을 가진 유사분열 세포의 축적을 유도하여 세포가 M기 초기에 정지되고 이후 apoptosis가 유도됨을 확인합니다. [1] 이 억제제의 낮은 나노몰 농도는 21 nM의 EC50으로 신경모세포종(NB) 종양 개시 세포(NB TIC)에 대해 강력한 억제 활성을 나타내는 반면, 마이크로몰 농도만 정상 소아 신경 줄기세포에 세포독성을 나타냅니다. [2] 이 물질은 BI 2536과 유사하게 Daoy 및 ONS-76 수모세포종 세포의 성장 정지를 유도합니다. [3]

BI6727 투여는 HCT116, NCI-H460 및 탁산 내성 CXB1 결장암을 포함한 여러 인간 암종 이종이식편의 성장을 유의하게 억제하며, 유사분열 지수 증가 및 세포자멸사 증가를 동반합니다. [1] 생체 내 연구에서 이 화합물은 BI2536에 비해 더 나은 독성 및 약동학적 프로파일을 보여줍니다. [3]

• 시험관 내 키나아제 분석

  재조합 인간 Plk1(잔기 1-603)은 바큘로바이러스 발현 시스템을 사용하여 NH₂-말단 GST-태그 융합 단백질로 발현되고 글루타티온-아가로스를 사용한 친화성 크로마토그래피로 정제됩니다. Plk1에 대한 효소 활성 분석은 20 ng의 재조합 키나아제와 10 μg의 소 우유 카제인을 기질로 사용하여 이 화합물을 계단식으로 희석한 상태에서 수행됩니다. 키나아제 반응은 최종 부피 60 μL에서 30 °C에서 45분 동안 수행됩니다 [15 mM MgCl₂, 25 mM MOPS (pH 7.0), 1 mM DTT, 1% DMSO, 7.5 μM ATP, 0.3 μCi γ-³²P-ATP]. 반응은 125 μL의 얼음처럼 차가운 5% TCA를 첨가하여 중단됩니다. 침전물을 MultiScreen 혼합 에스테르 셀룰로스 필터 플레이트로 옮긴 후, 플레이트를 1% TCA로 세척하고 방사능 측정으로 정량합니다. IC50 값 계산에는 용량-반응 곡선이 사용됩니다.

• 세포주

  HCT116, NCI-H460, BRO, GRANTA-519, HL-60, THP-1, and Raji

• 농도

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~1 μM

• 배양 시간

  24, 48, and 72 hours

• 방법

  Cell proliferation assays are done by incubating cells in the presence of various concentrations of this compound for 24, 48, and 72 hours and cell growth is assessed by measuring Alamar blue dye conversion in a fluorescence spectrophotometer. Effective concentrations at which cellular growth is inhibited by 50% (EC50) are extrapolated from the dose-response curve fit. To determine the DNA content, cell suspensions are fixed in 80% ethanol, treated for 5 minutes with 0.25% Triton X-100 in PBS, and incubated with 0.1% RNase and 10 μg/mL propidium iodide in PBS for 20 minutes at room temperature. Cell cycle profiles are determined by flow cytometric analysis.

• 동물 모델

  Female BomTac:NMRI-Foxn1^nu mice grafted s.c. with HCT116, NCI-H460, or CXB1 cells

• 용량

  ~25 mg/kg/day

• 투여

  Injected i.v., or given intragastrally via gavage needle