WAY-600

카탈로그 번호S2689 배치:S268901

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기술 자료

화학식

C₂₈H₃₀N₈O

분자량

494.59

CAS 번호

1062159-35-6

용해도 (25°C)*

시험관 내(In vitro)

DMSO

22 mg/mL (44.48 mM)

Ethanol

2 mg/mL (4.04 mM)

Water

Insoluble

생체 내(In Vivo) (개별적으로 순서대로 용매를 제품에 첨가하십시오.)

Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution	5%DMSO 1 40%PEG300 2 5%Tween80 3 50%ddH2O Selleck 연구소에서 검증했습니다. 이 제형에 대한 조정이 필요한 경우 맞춤형 테스트를 위해 당사 영업팀에 문의하십시오.	1.100mg/ml (2.22mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 22 mg/ml clarified DMSO stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 500 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results.
Clear solution	5% DMSO 1 95% Corn oil Selleck 연구소에서 검증했습니다. 이 제형에 대한 조정이 필요한 경우 맞춤형 테스트를 위해 당사 영업팀에 문의하십시오.	0.180mg/ml (0.36mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 3.6 mg/ml clear DMSO stock solution to 950 μL of corn oil and mix evenly. The mixed solution should be used immediately for optimal results.

* <1 mg/ml은 약간 용해되거나 불용해됨을 의미합니다.
* Selleck은 모든 화합물의 용해도를 자체적으로 테스트하며, 실제 용해도는 게시된 값과 약간 다를 수 있습니다. 이는 정상적인 현상이며, 약간의 배치 간 변동으로 인해 발생합니다.
* 실온 배송 (안정성 테스트 결과 이 제품은 냉각 조치 없이 배송될 수 있음을 보여줍니다.)

원액 준비

생물학적 활성

설명

WAY-600은 9 nM의 IC50을 갖는 강력하고 ATP 경쟁적인 mTOR 선택적 억제제입니다; 이 화합물은 mTORC1/P-S6K(T389) 및 mTORC2/P-AKT(S473)를 차단하지만 P-AKT(T308)는 차단하지 않습니다; PI3Kα (>100배) 및 PI3Kγ (>500배)보다 mTOR에 대해 선택적입니다.

표적

mTOR

9 nM

시험관 내(In vitro)

면역 복합체 키나아제 분석 결과, mTORC2 특이적 기질 His6-AKT 또는 mTORC1 기질 His6-S6K가 WAY-600에 의해 용량 의존적으로 억제됨을 보여줍니다. 이 화합물은 세포 모델에서 mTOR 신호 전달 및 AKT 기능을 용량 의존적으로 전체적으로 억제합니다. 이는 MDA361 인간 유방암 세포에서 캡 의존성 및 전체 단백질 합성을 심각하게 억제합니다. 이 화학 물질은 G1 세포 주기 정지 및 선택적 세포 사멸을 포함하는 다양한 암세포주에서 항증식 효과를 보입니다. U87MG, MDA361 및 LNCap 세포에서 혈관 신생 인자, VEGF 및 HIF-1α를 하향 조절합니다.

프로토콜 (참조)

키나아제 분석:^{^[1]}	정제된 FLAG-TOR의 DELFIA 형식 정제된 FLAG-TOR(FL 및 3.5)를 이용한 일상적인 분석은 다음과 같이 96웰 플레이트에서 수행됩니다. 효소는 먼저 키나아제 분석 버퍼(10mM Hepes (pH 7.4), 50mM NaCl, 50mM β-글리세로포스페이트, 10mM MnCl₂, 0.5mM DTT, 0.25lM 마이크로시스틴 LR 및 100lg/mL BSA)에 희석됩니다. 각 웰에 희석된 효소 12μL를 0.5μL의 테스트 억제제 또는 대조군 용매 디메틸 설폭사이드(DMSO)와 짧게 혼합합니다. 키나아제 반응은 ATP와 His6-S6K를 함유하는 키나아제 분석 버퍼 12.5μL를 첨가하여 시작되며, 최종 반응 부피는 25μL로 800ng/mL FLAG-TOR, 100μM ATP 및 1.25μM His6-S6K를 포함합니다. 반응 플레이트는 실온에서 부드럽게 흔들면서 2시간(1-6시간에서 선형) 동안 인큐베이션한 다음 25μL 정지 버퍼(20mM Hepes (pH 7.4), 20mM EDTA 및 20mM EGTA)를 첨가하여 종료됩니다. 인산화된(Thr-389) His6-S6K의 DELFIA 검출은 유로퓸-N1-ITC(Eu)(항체당 10.4 Eu)로 표지된 단일클론성 항-P(T389)-p70S6K 항체(1A5)를 사용하여 실온에서 수행됩니다. 종료된 키나아제 반응 혼합물 45μL를 55μL PBS를 함유하는 MaxiSorp 플레이트로 옮깁니다. His6-S6K는 2시간 동안 부착되도록 한 다음 웰을 흡인하고 PBS로 한 번 세척합니다. 40ng/mL Eu-P(T389)-S6K 항체가 포함된 DELFIA 버퍼 100μL를 첨가합니다. 항체 결합은 부드러운 교반과 함께 1시간 동안 계속됩니다. 그런 다음 웰을 흡인하고 0.05% Tween 20(PBST)을 함유하는 PBS로 4번 세척합니다. 각 웰에 DELFIA Enhancement solution 100μL를 첨가하고 플레이트는 PerkinElmer Victor 모델 플레이트 리더에서 판독됩니다. 얻은 데이터는 효소 활성 및 잠재적 억제제에 의한 효소 억제를 계산하는 데 사용됩니다.
세포 분석:^{^[1]}	세포주 MDA361, U87MG, HCT116, LNCap and HT29 cells 농도 0-100 μM 배양 시간 24 or 48 hours 방법 For cell cycle analysis, cells are seeded in 96-well culture plates at 10,000 cells per well for 24 hours, treated with various inhibitors for 24 hours or 48 hours. Following treatment, cells are harvested, washed with PBS and fixed overnight at -20 °C in 70% ethanol. Cells are washed, stained with propidium iodide and analyzed for cell cycle profile (acquired 5000 cells/well) on Guava PCA-96 instrument according to the Guava Cell Cycle Protocol

키나아제 분석:^{^[1]}

정제된 FLAG-TOR의 DELFIA 형식
정제된 FLAG-TOR(FL 및 3.5)를 이용한 일상적인 분석은 다음과 같이 96웰 플레이트에서 수행됩니다. 효소는 먼저 키나아제 분석 버퍼(10mM Hepes (pH 7.4), 50mM NaCl, 50mM β-글리세로포스페이트, 10mM MnCl₂, 0.5mM DTT, 0.25lM 마이크로시스틴 LR 및 100lg/mL BSA)에 희석됩니다. 각 웰에 희석된 효소 12μL를 0.5μL의 테스트 억제제 또는 대조군 용매 디메틸 설폭사이드(DMSO)와 짧게 혼합합니다. 키나아제 반응은 ATP와 His6-S6K를 함유하는 키나아제 분석 버퍼 12.5μL를 첨가하여 시작되며, 최종 반응 부피는 25μL로 800ng/mL FLAG-TOR, 100μM ATP 및 1.25μM His6-S6K를 포함합니다. 반응 플레이트는 실온에서 부드럽게 흔들면서 2시간(1-6시간에서 선형) 동안 인큐베이션한 다음 25μL 정지 버퍼(20mM Hepes (pH 7.4), 20mM EDTA 및 20mM EGTA)를 첨가하여 종료됩니다. 인산화된(Thr-389) His6-S6K의 DELFIA 검출은 유로퓸-N1-ITC(Eu)(항체당 10.4 Eu)로 표지된 단일클론성 항-P(T389)-p70S6K 항체(1A5)를 사용하여 실온에서 수행됩니다. 종료된 키나아제 반응 혼합물 45μL를 55μL PBS를 함유하는 MaxiSorp 플레이트로 옮깁니다. His6-S6K는 2시간 동안 부착되도록 한 다음 웰을 흡인하고 PBS로 한 번 세척합니다. 40ng/mL Eu-P(T389)-S6K 항체가 포함된 DELFIA 버퍼 100μL를 첨가합니다. 항체 결합은 부드러운 교반과 함께 1시간 동안 계속됩니다. 그런 다음 웰을 흡인하고 0.05% Tween 20(PBST)을 함유하는 PBS로 4번 세척합니다. 각 웰에 DELFIA Enhancement solution 100μL를 첨가하고 플레이트는 PerkinElmer Victor 모델 플레이트 리더에서 판독됩니다. 얻은 데이터는 효소 활성 및 잠재적 억제제에 의한 효소 억제를 계산하는 데 사용됩니다.

세포 분석:^{^[1]}

세포주
MDA361, U87MG, HCT116, LNCap and HT29 cells
농도
0-100 μM
배양 시간
24 or 48 hours
방법
For cell cycle analysis, cells are seeded in 96-well culture plates at 10,000 cells per well for 24 hours, treated with various inhibitors for 24 hours or 48 hours. Following treatment, cells are harvested, washed with PBS and fixed overnight at -20 °C in 70% ethanol. Cells are washed, stained with propidium iodide and analyzed for cell cycle profile (acquired 5000 cells/well) on Guava PCA-96 instrument according to the Guava Cell Cycle Protocol

참조

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=WYE-687

고객 제품 검증

: 데이터 출처 [ , , Biochem Biophys Res Commun, 2016, 474(2):330-7. ]

Sellecks WAY-600 인용됨 3 출판물

Disruption of FOXO3a-miRNA feedback inhibition of IGF2/IGF-1R/IRS1 signaling confers Herceptin resistance in HER2-positive breast cancer [ Nat Commun, 2021, 12(1):2699]	PubMed: 33976188
A Regulatory Circuit Orchestrated by Novel-miR-3880 Modulates Mammary Gland Development [ Front Cell Dev Biol, 2020, 8:383]	PubMed: 32656203
MEK-ERK inhibition potentiates WAY-600-induced anti-cancer efficiency in preclinical hepatocellular carcinoma (HCC) models [Wang K, et al. Biochem Biophys Res Commun, 2016, 474(2):330-7]	PubMed: 27107695

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인간, 수의학 진단 또는 치료 용도로 사용하지 마십시오.