Wortmannin (SL-2052)

Wortmannin에 의한 MLCK 억제는 칼모듈린이나 펩타이드 기질에 의해 영향을 받지 않으며, 고농도의 ATP에 의해 감소합니다. 이 화합물은 MLCK의 촉매 도메인과 직접 상호작용하여 효소 활성의 비가역적인 손실을 초래합니다. cAMP 의존성 단백질 키나아제, cGMP 의존성 단백질 키나아제, 칼모듈린 의존성 단백질 키나아제 II에 대한 억제는 없으며, 단백질 키나아제 C 활성에는 거의 영향을 미치지 않습니다. [1]

이 억제제는 N-포르밀메티오닐-류실페닐알라닌(fMLP)으로 자극된 PtdInsP3 (포스파티딜이노시톨 3,4,5-트리포스페이트) 형성을 IC50 5 nM로 억제하며, 이 억제는 인간 호중구에서 이 화합물 100 nM로 전처리 시 완전히 사라지고, PtdInsP2 수준은 증가하며 세포성 PtdInsP 및 PtdIns 함량에는 영향을 미치지 않습니다. 이는 F-액틴 함량의 진동 변화를 유발할 수 있으며 호중구에서 fMLP로 자극된 액틴 중합을 억제하지 않습니다. [2]

이 화학물질은 110-kDa 단백질에 결합하여 (IC50 3nM) 포스파티딜이노시톨 3-키나아제 (PI3-키나아제) 활성을 비가역적으로 억제하며, RBL-2H3 세포에서 PI4-키나아제에는 영향을 미치지 않습니다. 또한 류코트리엔 방출을 억제하며, 티로신 키나아제 Lyn 활성화에는 영향을 미치지 않습니다. [3]

이 화합물은 0.1 μM 농도에서 분리된 쥐 지방세포에서 유도된 헥소스 흡수를 완전히 제거하며, 자극된 지방 분해 활성은 손상시키지 않습니다. [4]

인간 제대정맥 내피 세포에서 IGF-1에 반응하여 500 nM 농도에서 유도된 산화질소 생성을 50% 억제합니다. [5]

이 화학물질은 50 μM 농도에서 중국 햄스터 난소 세포에서 DNA 이중 가닥 파손(DSB) 복구를 억제하고 DSB 수준이나 단일 가닥 파손(SSB) 복구의 동역학에는 영향을 미치지 않습니다. 이온화 방사선(IR) 유발 세포독성을 강화할 수 있으며 자체적으로 독성은 없습니다. [6]

이 억제제는 온전한 G2/M 정지 세포에서 24 nM의 IC50으로 폴로 유사 키나아제(PLK1) 활성을 억제합니다. [7]

인간 대식세포에서 EC50 50 nM로 톨유사수용체(TLR) 매개 IL-6 축적을 증가시킵니다. 한편, 이 화합물은 쥐 대식세포에서 TLR 매개 유도성 산화질소 합성효소(iNOS) 발현 및 아질산염 축적을 유의하게 향상시킵니다. 핵인자-κB를 활성화하고 사이토카인 mRNA 생성을 상향 조절합니다. [8]

이 화학물질은 또한 유사분열에서 중요한 역할을 하는 Polo-like kinase (PlK) 1과 PlK3을 억제합니다. 이 처리법은 DNA 손상에 의해 유도된 세린 20에서의 p53 인산화를 감소시킬 수 있습니다. [9]

SW1990 세포에서 히알루론산 유도 Akt 인산화 및 세포 운동성/이동을 억제합니다. [10]

Wortmannin은 1 mg/kg에서 생쥐의 SW1990 복막 전이를 체중 감소 없이 억제합니다. [10]

이 화합물은 0.7 mg/kg에서 사망률이나 급성 독성 없이 정상 조직(폐, 심장, 뇌 균질액)과 생쥐의 종양 조직 모두에서 포스파티딜이노시티드 3-키나아제-단백질 키나아제 B(PKB)/Akt 인산화를 억제합니다. LY188011과의 병용 요법에서 이 화학물질은 정형 종양에서 세포자멸사를 유의하게 증가시키고 종양 성장을 억제하는 반면, 단일 요법으로는 불가능했습니다. [11]

• MLCK 분석

  MLCK 활성은 펩타이드 기질 (KKRPQRATSNVFS-NH₂) 또는 미오신 경쇄로 분석됩니다. 펩타이드 기질 (24 μM)은 25 mM Tris-HC1 (pH 7.5), 0.5 mg/mL 소 혈청 알부민, 4 mM MgCl₂, 0.5 mM CaCl₂, 2.6 nM 칼모듈린, 1.5 nM MLCK, 및 400 μM ATP를 포함하는 반응 혼합물 0.25 mL 최종 부피에서 인산화됩니다. ATP 없이 28 ºC에서 10분간 사전 배양 후, 28 ºC에서 ATP를 첨가하여 반응을 시작하고 30분 후 0.1 mL의 10% (v/v) 아세트산을 첨가하여 반응을 중단합니다. 혼합물은 고성능 액체 크로마토그래피로 분석됩니다: 컬럼, Unisil Pack 5C18 4.6 X 150 mm; 용매, 18% (v/v) 아세토니트릴, 0.1% (v/v) 트리플루오로아세트산 수용액; 유속, 1.0 mL/min; 온도, 40 ºC; 검출, 220 nm에서 흡광도. 반응 백분율은 인산화된 형태의 피크 면적 대 비인산화된 형태의 피크 면적 비율로 계산됩니다. 위에 설명된 조건에서 측정된 비활성은 0.81 μmol/min/mg입니다. 미오신 경쇄 (108 μg/mL)는 25 mM Tris-HC1 (pH 7.5), 0.5 mg/mL 소 혈청 알부민, 4 mM MgCl₂, 0.5 mM CaCl₂, 4.2 nM 칼모듈린, 0.92 nM 효소, 및 10 μM [γ-³²P]ATP (100-900 cpm/pmol)를 포함하는 반응 혼합물 0.25 mL 최종 부피에서 인산화됩니다. ATP 없이 30 ºC에서 3분간 사전 배양 후, 30 ºC에서 [γ-³²P]ATP를 첨가하여 반응을 시작하고 5분 후 0.125 mL의 트리클로로아세트산을 첨가하여 반응을 중단합니다. 산성 침전물은 니트로셀룰로스 막 필터에 수집하고 5% (v/v) 트리클로로아세트산 1 mL씩 4회 세척합니다. 필터 상의 방사능은 Packard Tri-Carb 액체 섬광 계측기 모델 4530을 사용하여 톨루엔 섬광액에서 측정됩니다. 이 조건에서 측정된 비활성은 1.23 μmol/min/mg입니다. [1]

• 세포주

  NK cells

• 농도

  1 μM

• 배양 시간

  1 h

• 방법

  Primary NK cells were pretreated with wortmannin (1 μM) for 1 h, washed twice with RPMI 1640, and then treated with IL-15 (10 ng/mL) for 24 h. DMSO was used as control.

• 동물 모델

  Human pancreatic adenocarcinoma cells PK1 are injected both s.c. and orthotopically into SCID mice.

• 용량

  0.175, 0.35, and 0.7 mg/kg

• 투여

  Injected by i.v.