WYE-125132 (WYE-132)

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기술 자료

화학식

C27H33N7O4
분자량 519.6 CAS 번호 1144068-46-1
용해도 (25°C)* 시험관 내(In vitro) DMSO 104 mg/mL (200.15 mM)
Water Insoluble
Ethanol Insoluble
생체 내(In Vivo) (개별적으로 순서대로 용매를 제품에 첨가하십시오.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution
30%PEG400 0.5%Tween80 5%propylene glycol

Selleck 연구소에서 검증했습니다. 이 제형에 대한 조정이 필요한 경우 맞춤형 테스트를 위해 당사 영업팀에 문의하십시오.

 30.000mg/ml (57.74mM) Taking the 1 mL working solution as an example, add 300 μL of 100 mg/ml clarified PEG400 stock solution to 5 μL of Tween80, mix evenly to clarify it; add 50 μL Propylene glycol to the above system, mix evenly to clarify it; then continue to add 645 μL ddH2O to adjust the volume. to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results. 
* <1 mg/ml은 약간 용해되거나 불용해됨을 의미합니다.
* Selleck은 모든 화합물의 용해도를 자체적으로 테스트하며, 실제 용해도는 게시된 값과 약간 다를 수 있습니다. 이는 정상적인 현상이며, 약간의 배치 간 변동으로 인해 발생합니다.
* 실온 배송 (안정성 테스트 결과 이 제품은 냉각 조치 없이 배송될 수 있음을 보여줍니다.)

원액 준비

생물학적 활성

설명 WYE-125132 (WYE-132)는 0.19 nM의 IC50을 갖는 고효능 ATP 경쟁적 mTOR 억제제이며, PI3K 또는 PI3K 관련 키나아제 hSMG1 및 ATR에 비해 mTOR에 대해 높은 선택성을 갖습니다.
표적
mTOR
(Cell-free assay)
0.19 nM
시험관 내(In vitro) WYE-125132 (WYE-132)는 재조합 mTOR 키나아제를 0.19 nM의 IC50으로 강력하게 ATP 경쟁적으로 억제하며, 다양한 PI3K 및 230개 단백질 키나아제 패널에 대해 높은 선택성을 보입니다. 시험관 내에서, 이는 2 nM (LNCap)에서 380 nM (HTC116)에 이르는 IC50을 가진 종양 세포주 패널에 대해 유의미한 항증식 활성을 나타냅니다. 또한, 이 화합물은 세포 주기 진행, 세포 사멸 유도, 단백질 합성 및 세포 크기 억제를 유발합니다. 이는 mTORC1을 억제함으로써 활발히 증식하는 MG63, MDA361 및 HEK293 세포에서 각각 72%, 80%, 53%의 pre-tRNALeu 합성 감소를 초래합니다. 또한, WYE-125132는 Maf1(Pol III 전사의 음성 조절자)의 탈인산화 및 핵 내 축적을 유도하는 것으로 밝혀졌습니다.
생체 내(In Vivo) WYE-125132 (WYE-132) (5 mg/kg p.o.)는 PI3K/mTOR- 및 HER2-과활성 MDA361 종양 모델에서 유의미한 항종양 활성을 생성하고 용량 의존적인 종양 성장 지연을 유발합니다. 또한, PTEN-null 교모세포종 U87MG, 비소세포성 폐암 H1975 및 A549 모델에서도 강력한 항종양 효능을 보입니다.
특징 고효능 ATP 경쟁적 특이적 mTOR 키나아제 억제제.

프로토콜 (참조)

키나아제 분석:[1]
  • 키나아제 분석

    WYE-125132 (WYE-132)에 대한 해리 증강 란타나이드 형광 면역분석법(DELFIA), ATP 매트릭스 분석법 및 mTOR 면역복합체 키나아제 분석법을 통한 mTOR 효소 분석은 다음과 같이 수행됩니다. LNCap 세포 용해물의 내인성 TOR는 anti-FRAP/TOR (N-19)에 의해 면역침강됩니다. 세포 용해물 (1.0 mg)은 1 mL 용해 완충액에서 Protein-G/A 아가로스에 결합된 4 μg 항체와 혼합됩니다. 면역복합체는 용해 완충액, 용해 완충액 + 500 mM KCl, 키나아제 완충액 세척액으로 순차적으로 세척됩니다. 면역복합체는 10 mM Hepes (pH 7.4), 50 mM NaCl, 50 mM β-글리세로포스페이트, 0.5 μM 마이크로시스틴 LR, 1 mM DTT, 10 mM MnCl2, 100 μM ATP, 1 μg His6-S6K 또는 1 μg His6-4EBP1을 포함하는 최종 부피 50 μL에서 30 °C에서 30분 동안 키나아제 반응을 받습니다. 키나아제 반응(면역복합체 및 정제된 효소)은 NuPAGE LDS 샘플 완충액으로 중단되고 anti-P(T389)-p70S6K 및 anti-P(T46)-4EBP1, anti-FRAP/TOR (N-19), anti-FLAG M2 및 anti-His6 (클론 His-1)로 웨스턴 블로팅을 위해 4-12% NuPAGE Bis-Tris 젤에서 분리됩니다. 방사성 분석에서, 10 μCi [γ-32P]ATP (3000 Ci/mmol) 및 100 μM 비방사성 ATP가 사용됩니다. 32P 표지된 생성물은 SDS-PAGE에 의해 분리되고 코닥 X-선 필름에 대한 자동방사선 사진에 제출됩니다.
세포 분석:[1]
  • 세포주

    MDA-MB-361, MDA-MB-231, MDA-MB-468, BT549, LNCap, A549, H1975, H157, H460, U87MG, A498, 786-O, HCT116, MG63, Rat1, HEK293, and HeLa

  • 농도

    0 to 10 μM

  • 배양 시간

    24 hours

  • 방법

    Cell lines of MDA-MB-361, MDA-MB-231, MDA-MB-468, BT549, LNCap, A549, H1975, H157, H460, U87MG, A498, 786-O, HCT116, MG63, Rat1, HEK293, and HeLa are obtained from the American Type Culture Collection. Cell growth assays and IC50 determination are described as follows. For tumor cell growth assays, cells are plated in 96-well culture plates at 1000 to 3000 cells per well for 24 hours, treated with DMSO or various doses of WYE-125132 (WYE-132). Viable cell densities are determined three days later by MTS assay employing an assay kit following the kit assay protocol. The effect of each treatment is calculated as percent of control growth relative to the DMSO-treated cells grown in the same culture plate. Inhibitor dose response curves are plotted for determination of IC50 values.
동물 연구:[1]
  • 동물 모델

    U87MG, MDA361, H1975, A549, A498, and 786-O cells are injected s.c. into the right flank of CD1 nu/nu mice.

  • 용량

    ≤50 mg/kg

  • 투여

    Administered via i.v. or p.o.

참조

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20068177/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20233713/

고객 제품 검증

SW620 and SW620:8055R cells were treated with increasing concentrations of WYE-125132 for 24 hours and cell proliferation was assayed by [<sup>3</sup>H]thymidine incorporation. Results are the mean盋oV for three biological replicates from a single experiment; identical results were obtained in n=3 experiments.

데이터 출처 [ J Cell Sci , 2014 , 127(Pt 4), 788-800 ]

Sellecks WYE-125132 (WYE-132) 인용됨 9 출판물

Suppression of MYC by PI3K/AKT/mTOR pathway inhibition in combination with all-trans retinoic acid treatment for therapeutic gain in acute myeloid leukaemia [ Br J Haematol, 2022, 10.1111/bjh.18187] PubMed: 35468223
Identification of New Vulnerabilities in Conjunctival Melanoma Using Image-Based High Content Drug Screening [ Cancers (Basel), 2022, 14(6)1575] PubMed: 35326726
Expression of HYOU1 via Reciprocal Crosstalk between NSCLC Cells and HUVECs Control Cancer Progression and Chemoresistance in Tumor Spheroids [ Mol Cells, 2021, 44(1):50-62] PubMed: 33455947
An evolutionarily young defense metabolite influences the root growth of plants via the ancient TOR signaling pathway [ Elife, 2017, 6e29353] PubMed: 29231169
mTOR inhibitors activate PERK signaling and favor viability of gastrointestinal neuroendocrine cell lines [ Oncotarget, 2017, 8(13):20974-20987] PubMed: 28423496
Rapalogs can promote cancer cell stemness in vitro in a Galectin-1 and H-ras-dependent manner [ Oncotarget, 2017, 8(27):44550-44566] PubMed: 28562352
Adaptation to mTOR kinase inhibitors by amplification of eIF4E to maintain cap-dependent translation. [Cope CL, et al. J Cell Sci, 2014, 127(Pt 4):788-800] PubMed: 24363449
Deciphering Combinations of PI3K/AKT/mTOR Pathway Drugs Augmenting Anti-Angiogenic Efficacy In Vivo [Sasore T, et al PLoS One, 2014, 9(8):e105280] PubMed: 25144531
Murine dendritic cell rapamycin-resistant and rictor-independent mTOR controls IL-10, B7-H1, and regulatory T-cell induction. [ Blood, 2013, 121(18):3619-30] PubMed: 23444404

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