WZ4003

카탈로그 번호S7317 배치:S731701

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기술 자료

화학식

C₂₅H₂₉ClN₆O₃

분자량

496.99

CAS 번호

1214265-58-3

용해도 (25°C)*

시험관 내(In vitro)

DMSO

10 mg/mL (20.12 mM)

Water

Insoluble

Ethanol

Insoluble

생체 내(In Vivo) (개별적으로 순서대로 용매를 제품에 첨가하십시오.)

Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution	5%DMSO 1 40%PEG300 2 5%Tween80 3 50%ddH2O Selleck 연구소에서 검증했습니다. 이 제형에 대한 조정이 필요한 경우 맞춤형 테스트를 위해 당사 영업팀에 문의하십시오.	0.350mg/ml (0.70mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 7 mg/ml clarified DMSO stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 500 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results.
Clear solution	5% DMSO 1 95% Corn oil Selleck 연구소에서 검증했습니다. 이 제형에 대한 조정이 필요한 경우 맞춤형 테스트를 위해 당사 영업팀에 문의하십시오.	0.350mg/ml (0.70mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 7 mg/ml clear DMSO stock solution to 950 μL of corn oil and mix evenly. The mixed solution should be used immediately for optimal results.

* <1 mg/ml은 약간 용해되거나 불용해됨을 의미합니다.
* Selleck은 모든 화합물의 용해도를 자체적으로 테스트하며, 실제 용해도는 게시된 값과 약간 다를 수 있습니다. 이는 정상적인 현상이며, 약간의 배치 간 변동으로 인해 발생합니다.
* 실온 배송 (안정성 테스트 결과 이 제품은 냉각 조치 없이 배송될 수 있음을 보여줍니다.)

원액 준비

생물학적 활성

설명

WZ4003은 세포 기반 분석에서 NUAK1과 NUAK2에 대해 각각 20 nM 및 100 nM의 IC50을 갖는 고도로 특이적인 NUAK 키나아제 억제제이며, 139개의 다른 키나아제에 대한 유의미한 억제는 없습니다.

표적

NUAK1 (Cell-free assay)	NUAK2 (Cell-free assay)
20 nM	100 nM

시험관 내(In vitro)

야생형 NUAK1을 발현하는 HEK-293 세포에서 WZ4003 (3–10 μM)은 NUAK1 매개 MYPT1 인산화를 현저하게 억제합니다. 또한, 이 화합물 (10 μM)은 MYPT1 Ser445 인산화뿐만 아니라 세포 이동, 침윤 및 증식을 MEF에서 NUAK1의 녹아웃 또는 U2OS 세포에서 녹다운과 유사한 정도로 억제합니다. 또한 L858R/T790M 돌연변이 EGFR에 대한 높은 특이적 친화도를 나타내며, T790M을 함유하는 Ba/F3 세포에 대해 현저히 감소된 세포 IC50을 보입니다.

프로토콜 (참조)

키나아제 분석:^{^[1]}	IC50 결정 활성 GST–NUAK1, GST–NUAK1[A195T] 및 GST–NUAK2 효소는 N-말단 GST 태그된 NUAK1, NUAK1[A195T] 또는 NUAK2를 발현하는 pEBG2T 포유류 구조물의 일시적 형질감염 후 36–48시간 후에 HEK-293 세포 용해물에서 글루타티온-세파로스를 사용하여 정제됩니다. 펩타이드 키나아제 분석을 위해 96웰 플레이트가 사용되며, 각 반응은 삼중으로 수행됩니다. 각 반응은 50 mM Tris/HCl (pH 7.5), 0.1 mM EGTA, 10 mM 마그네슘 아세테이트, 200 μM Sakamototide, 0.1 mM [γ -³²P]ATP (450–500 c.p.m./pmol) 및 DMSO에 용해된 억제제의 지정된 농도를 포함하는 총 50 μL 부피로 설정됩니다. 30°C에서 30분 동안 인큐베이션한 후, 마그네슘을 킬레이트화하기 위해 25 mM (최종) EDTA를 첨가하여 반응을 종료합니다. 그런 다음 반응 혼합물 40 μL를 P81 종이에 스팟하고 50 mM 인산에 담급니다. 샘플은 50 mM 인산에서 세 번 세척한 다음 아세톤으로 한 번 헹구고 공기 건조합니다. Sakamototide로의 [γ -³²P]ATP 통합은 체렌코프 계수로 정량화됩니다. 값은 DMSO 대조군의 백분율로 표현됩니다. IC50 곡선이 개발되고 IC50 값은 GraphPad Prism 소프트웨어를 사용하여 계산됩니다.
세포 분석:^{^[1]}	세포주 U2OS cells, and MEFs 농도 ~10 μM 배양 시간 5 days 방법 Cell proliferation assays are carried out colorimetrically in 96-well plates using the CellTiter 96 AQueous Non-Radioactive Cell Proliferation Assay kit following the manufacturer’s protocol. Initially, 2000 cells per well are seeded for U2OS cells and 3000 cells per well are seeded for MEFs. The proliferation assays are carried out over 5 days in the presence or absence of 10 μM this compound.

키나아제 분석:^{^[1]}

IC50 결정
활성 GST–NUAK1, GST–NUAK1[A195T] 및 GST–NUAK2 효소는 N-말단 GST 태그된 NUAK1, NUAK1[A195T] 또는 NUAK2를 발현하는 pEBG2T 포유류 구조물의 일시적 형질감염 후 36–48시간 후에 HEK-293 세포 용해물에서 글루타티온-세파로스를 사용하여 정제됩니다. 펩타이드 키나아제 분석을 위해 96웰 플레이트가 사용되며, 각 반응은 삼중으로 수행됩니다. 각 반응은 50 mM Tris/HCl (pH 7.5), 0.1 mM EGTA, 10 mM 마그네슘 아세테이트, 200 μM Sakamototide, 0.1 mM [γ -³²P]ATP (450–500 c.p.m./pmol) 및 DMSO에 용해된 억제제의 지정된 농도를 포함하는 총 50 μL 부피로 설정됩니다. 30°C에서 30분 동안 인큐베이션한 후, 마그네슘을 킬레이트화하기 위해 25 mM (최종) EDTA를 첨가하여 반응을 종료합니다. 그런 다음 반응 혼합물 40 μL를 P81 종이에 스팟하고 50 mM 인산에 담급니다. 샘플은 50 mM 인산에서 세 번 세척한 다음 아세톤으로 한 번 헹구고 공기 건조합니다. Sakamototide로의 [γ -³²P]ATP 통합은 체렌코프 계수로 정량화됩니다. 값은 DMSO 대조군의 백분율로 표현됩니다. IC50 곡선이 개발되고 IC50 값은 GraphPad Prism 소프트웨어를 사용하여 계산됩니다.

세포 분석:^{^[1]}

세포주
U2OS cells, and MEFs
농도
~10 μM
배양 시간
5 days
방법
Cell proliferation assays are carried out colorimetrically in 96-well plates using the CellTiter 96 AQueous Non-Radioactive Cell Proliferation Assay kit following the manufacturer’s protocol. Initially, 2000 cells per well are seeded for U2OS cells and 3000 cells per well are seeded for MEFs. The proliferation assays are carried out over 5 days in the presence or absence of 10 μM this compound.

참조

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/24171924/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20033049/

고객 제품 검증

: , , J Cell Mol Med, 2017, 21(7):1411-1419

: 데이터 출처 [ , , Brain Behav Immun, 2018, 72:89-100 ]

Sellecks WZ4003 인용됨 15 출판물

NUAK1 activates STAT5/GLI1/SOX2 signaling to enhance cancer cell expansion and drives chemoresistance in gastric cancer [ Cell Rep, 2024, 43(7):114446]	PubMed: 38996065
The Roles and Regulatory Mechanisms of Tight Junction Protein Cingulin and Transcription Factor Forkhead Box Protein O1 in Human Lung [ Int J Mol Sci, 2024, 25(3):1411.]	PubMed: 38338691
The Roles and Regulatory Mechanisms of Tight Junction Protein Cingulin and Transcription Factor Forkhead Box Protein O1 in Human Lung Adenocarcinoma A549 Cells and Normal Lung Epithelial Cells [ Int J Mol Sci, 2024, 25(3)1411]	PubMed: 38338691
Localized Inhibition of Protein Phosphatase 1 by NUAK1 Promotes Spliceosome Activity and Reveals a MYC-Sensitive Feedback Control of Transcription. [ Mol Cell, 2020, 77(6):1322-1339]	PubMed: 32006464
Dual targeting of NUAK1 and ULK1 using the multitargeted inhibitor MRT68921 exerts potent antitumor activities [ Cell Death Dis, 2020, 11(8):712]	PubMed: 32873786
Microglia-Derived Extracellular Vesicles Carrying miR-711 Alleviate Neurodegeneration in a Murine Alzheimer's Disease Model by Binding to Itpkb [ Front Cell Dev Biol, 2020, 8:566530]	PubMed: 33240878
Safflor yellow A protects vascular endothelial cells from ox-LDL-mediated damage [ J Recept Signal Transduct Res, 2020, 1-8]	PubMed: 33167774
WZ4003 sensitizes non-small cell lung cancer cells to gefitinib via inhibition of ARK5 and epithelial-to-mesenchymal transition [ Am J Transl Res, 2020, 12(11):7377-7385]	PubMed: 33312374
Endothelial HNF4α potentiates angiogenic dysfunction via enhancement of vascular endothelial growth factor resistance in T2DM. [ J Cell Biochem, 2019, 120(8):12989-13000]	PubMed: 30873661
An Ancient Chinese Herbal Decoction Containing Angelicae Sinensis Radix, Astragali Radix, Jujuba Fructus, and Zingiberis Rhizoma Recens Stimulates the Browning Conversion of White Adipocyte in Cultured 3T3-L1 Cells. [ Evid Based Complement Alternat Med, 2019, 2019:3648685]	PubMed: 31316571

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