Zotarolimus (ABT-578)

Zotarolimus (ABT-578)는 라파마이신 42번 위치의 천연 수산기를 테트라졸 고리로 치환하여 만든 라파마이신의 반합성 유사체입니다. 이 화합물은 평활근 세포와 내피 세포 증식 모두를 억제하는 데 매우 효과적이며, IC50 값은 각각 2.9 nM 및 2.6 nM입니다. [1] 이는 면역필린 FKBP12에 대한 높은 결합 친화성 및 인체 및 쥐 T 세포의 시험관 내 증식을 억제하는 데 비교할 만한 효능을 가지는 점에서 시롤리무스와 기계적으로 유사합니다. Zotarolimus는 Con A 유도 인체 T 세포 및 쥐 T 세포 증식을 각각 7.0 nM 및 1337 nM의 IC50으로 억제합니다. [2]

Zotarolimus (ABT-578)는 28일 동안 잘 특성화된 관상 동맥 재협착증의 돼지 모델에서 신생내막 형성을 효과적으로 감소시킵니다. 신생내막 비후를 예방하는 데 효과적인 것으로 보이며, 베어메탈 스텐트에 비해 후기 손실을 1.03mm에서 0.62mm로 줄이고 TVF를 47% 감소시킵니다 (Driver 스텐트의 15.4%에서 Endeavor 스텐트의 8.1%로). [1] 이 화합물은 보조 DTH, EAE 및 심장 동종이식 거부 반응을 억제하는 데 효능이 있으며, ED50 값은 각각 1.72, 1.17 및 3.71 mg/kg/일입니다. [2]

• FKBP12에 대한 결합 친화도

  96웰 마이크로 플레이트에 FKBP-12 CMP-KDO 합성효소 융합 단백질을 10 μg/mL 농도로 100 μL/웰씩 2-3시간 동안 코팅한 후, 50 μL/웰의 완충액 A (2% BSA 및 0.2% Tween-20 in D-PBS)를 30-60분 동안 첨가합니다. 그 다음 마이크로 플레이트를 완충액 B (0.2% Tween in D-PBS, pH 7.4로 조정)로 세 번 세척합니다. 완충액 A 50 μL (최대), 완충액 A에 20 μM FK506 (배경), 또는 완충액 A에 다양한 농도의 Zotarolimus (ABT-578) (10 pM-1 μM)를 각 웰에 첨가한 후, 완충액 A에 A-79397 (FK506 유사체)-알칼리성 인산가수분해효소 접합체 50 μL를 첨가합니다. 마이크로 플레이트는 실온에서 2-2.5시간 동안 배양한 후, 완충액 B로 세 번 세척합니다. 각 웰에 0.1 M 아미노메틸프로판올에 pNPP (p-니트로페닐인산) 약 100 μL를 첨가하고, 플레이트를 실온에서 90-120분 동안 배양합니다. 405 nM에서의 흡광도는 ELISA 플레이트를 사용하여 측정합니다.

• 세포주

  Human coronary artery cells

• 농도

  ~1 μM

• 배양 시간

  5 days

• 방법

  Cell proliferation is assayed by measuring tritiated thymidine incorporation in vitro. Human coronary artery cells (hCa) are seeded into tissue culture flasks for expansion and applied to 96-well plates at desired density in complete media (5000 hCaSMC; 10 000 hCaEC). After 2 days, complete media is replaced with incomplete media to synchronize cells and induce G0 state. Two days later, incomplete media are removed and replaced with complete media (serum/growth factors) to induce G0 to G1 transition. Complete media also contain Zotarolimus (ABT-578) at desired concentrations to determine its effects on cell proliferation. On day 7, ³H-thymidine is added to cells to monitor DNA synthesis, and cells are harvested after overnight incorporation of radioactivity. After an incubation period of 72 h, 25 μL (1 μCi/well) of ³H-thymidine are added to each well. The cells are incubated at 37°C for 16-18 h to allow for incorporation of ³H-thymidine into newly synthesized DNA and the cells harvested onto 96-well plates containing bonded glass fibre filters . The filter plates are air-dried overnight, MicroScint-20 (25 μL) added to each filter well and counted. Drug activity is determined by the inhibition of ³H-thymidine incorporation into newly synthesized DNA relative to cells grown in complete media.

• 동물 모델

  Male Sprague-Dawley rats

• 용량

  2.5 mg/kg

• 투여

  intravenous or oral