PIK-93 PI4K inhibitor

A novel and potent inhibitor of both PI3Kγ and PI4KIIIβ.

PIK-93 remt PI3Kγ en PI4KIIIβ, met IC50-waarden van respectievelijk 16 nM en 19 nM. Deze verbinding remt ook andere leden van PI3Ks, waaronder PI3Kα, β, en δ, met IC50-waarden van respectievelijk 39 nM, 0,59 μM, en 0,12 μM. Het vertoont geen duidelijk remmend effect tegen een panel van andere kinasen, zelfs niet bij een concentratie van 10 μM. [1] In gedifferentieerde HL60 (dHL60) cellen, vermindert deze verbinding (0,5 μM–1 μM) de consolidatie en stabiliteit van de leidende rand die wordt gevormd na behandeling met uniform f-Met-Leu-Phe (fMLP). Het verandert de lokalisatie, maar niet de hoeveelheid, van de fMLP-afhankelijke accumulatie van totaal F-actine. In fMLP-gradiënten vermindert deze chemische stof de chemotactische index en verdrievoudigt het de draaifrequentie van de cellen. [2] In COS-7 cellen, heft deze verbinding (250 nM) effectief de accumulatie van CERT-PH-domein en FL-Cer in Golgi op. Het remt bij dezelfde concentratie ook significant de omzetting van [³H]serine-gelabeld endogeen ceramide naar sfingomyeline. Deze feiten duiden op een sleutelrol van PI4KIIIβ in ceramidetransport tussen het ER en Golgi, evenals in de regulatie van sfingomyelinesynthese. [3] In T6.11 cellen, vermindert deze verbinding (300 nM) de carbachol-geïnduceerde translocatie van TRPC6 naar het plasmamembraan en de netto Ca²⁺-instroom. [4] Een recent rapport toont aan dat deze chemische stof anti-enterovirale effecten heeft, zoals blijkt uit de remming van zowel poliovirus (PV) als hepatitis C-virus (HCV) replicatie, met EC50-waarden van respectievelijk 0,14 µM en 1,9 µM. [5]

Analyse van PI3Ks

IC50-waarden worden gemeten met behulp van een standaard TLC-analyse voor lipidkinaseactiviteit. Kinase-reacties worden uitgevoerd door een reactiemengsel te bereiden dat kinase, PIK-93 (2% DMSO eindconcentratie), buffer (25 mM HEPES, pH 7,4, 10 mM MgCl₂), en vers gesoniceerd fosfatidylinositol (100 µg/ml) bevat. Reacties worden geïnitieerd door de toevoeging van ATP met 10 µCi γ-³²P-ATP tot een eindconcentratie van 10 of 100 µM, en mogen 20 minuten bij kamertemperatuur verlopen. Voor TLC-analyse worden de reacties vervolgens beëindigd door de toevoeging van 105 µL 1N HCl gevolgd door 160 µL CHCl₃:MeOH (1:1). Het bifasische mengsel wordt gewerveld, kort gecentrifugeerd en de organische fase wordt met behulp van een gel-laadpipetpunt die vooraf is bekleed met CHCl₃ naar een nieuwe buis overgebracht. Dit extract wordt op TLC-platen gespot en gedurende 3 uur–4 uur ontwikkeld in een 65:35-oplossing van n-propanol:1M azijnzuur. De TLC-platen worden vervolgens gedroogd, blootgesteld aan een fosforimager-scherm en gekwantificeerd. Kinase-activiteit wordt doorgaans gemeten bij 10–12 concentraties van deze verbinding, wat tweevoudige verdunningen van de hoogste concentratie van 100 μM vertegenwoordigt.