Cell Counting Kit-8 (CCK-8)

필수 재료 (미포함)

• 마이크로플레이트 리더 (450 nm 필터)
• 10 μl, 100-200 μl 및 다채널 피펫.
• 1 % SDS (선택 사항).

실험 절차

1) 세포 배양 플라스크 또는 접시에 세포를 접종하고, 실험을 진행하기 전에 약 4-24시간 동안 세포가 부착하거나 성장하도록 둡니다.
2) Cell Counting Kit-8 (CCK-8)의 1/10 부피를 배양 배지에 있는 세포에 직접 추가합니다. 플레이트 외부를 여러 번 가볍게 두드려 기포를 피하면서 균일한 용액이 되도록 철저히 섞습니다. 96웰 플레이트의 경우, 100 µl 배양 배지당 10 µl Cell Counting Kit-8 (CCK-8)을 추가합니다.
3) 세포 배양 인큐베이터에서 37°C에서 0.5시간에서 4시간 동안 색이 주황색으로 변할 때까지 배양합니다. 과도한 배양은 잘못된 결과를 초래할 수 있습니다.
참고: 검출 감도는 배양 시간이 길어질수록 증가합니다. 세포 수가 적은 샘플의 경우 최대 24시간까지 더 긴 배양 시간을 사용하십시오.
4) 마이크로플레이트 리더를 사용하여 Cell Counting Kit-8 (CCK-8)의 450 nm 흡광도를 측정하여 결과를 기록합니다. 권장 OD 값 범위는 0.8-1.5이지만, 0.5-2.5 사이의 값도 허용됩니다.
참고: Cell Counting Kit-8 (CCK-8)과 함께 배양된 배지에서는 450 nm 부근에서 약간의 자발적인 흡광도가 발생합니다. 이 배경 흡광도는 배양 배지, pH, 배양 시간 및 빛 노출 시간에 따라 달라집니다. 2시간 배양 후의 일반적인 배경 흡광도는 0.1 - 0.2 흡광 단위입니다. 이를 보정하려면 세포가 없는 하나 이상의 대조군 웰을 준비하고 대조군 웰의 평균 흡광도를 다른 웰의 흡광도에서 뺍니다.
5) 선택 사항: 반응을 중지하기 위해 1% SDS 10 μl (0.1 g SDS를 PBS 완충액에 용해하여 10 ml 용액 준비)를 100 μl 세포에 직접 추가합니다. 신호는 흡광도 값에 영향을 주지 않고 3일 이내에 읽을 수 있습니다.
6) 세포 생존율 계산:
세포 생존율 (%)
A (Drug+) : 세포, CCK-8 및 약물이 포함된 웰의 OD 값;
A (Drug-) : 세포, CCK-8은 포함되지만 약물은 포함되지 않은 웰의 OD 값;
A (Black): 배양 배지 및 CCK-8은 포함되지만 세포는 포함되지 않은 웰의 OD 값.

프로토콜 간략 요약

응용 분야

1) 세포 증식 측정 – Selleck Cell Counting Kit-8 (CCK-8)은 수용성이며 배양에서 안정적이고 비독성입니다.
2) 세포 생존력 분석 – 대사 활동 및 염료 생성은 변화된 생존력에 비례하여 변화합니다.
3) 사이토카인 분석 – 사이토카인 유도 증식을 측정합니다. 원한다면 연구가 끝난 후 세포를 회수하고 확장할 수 있습니다.
4) 세포 독성 분석 – 세포 독성 화학 물질로 인한 세포 사멸은 색상 개발에 영향을 미치지 않으며, 살아있는 세포만이 시약을 비색 지시약으로 전환합니다. 시약 자체는 독성이 무시할 만하며 일반적으로 세포에 안전합니다.

참고

1. Cell Counting Kit-8 (CCK-8)은 즉시 사용 가능한 용액입니다. 사용 전에 시약을 섞어 균일한 용액이 되도록 합니다.
2. 더 긴 배양 시간 (밤새)을 사용할 계획이라면, 시약 추가 및 배양 동안 미생물 오염을 피하기 위해 무균 조건을 유지해야 합니다. 오염된 배양액은 미생물 오염물질도 Cell Counting Kit-8 (CCK-8)을 환원시키므로 잘못된 결과를 초래할 수 있습니다.
3. 적절한 분석 대조군을 포함해야 합니다. 실험 오류를 최소화하기 위해 실험 및 배지만 있는 대조군에 대해 최소 3-8회 반복 측정을 권장합니다.
4. 본 제품은 연구 개발용으로만 사용되며, 의료, 가정 또는 기타 용도로는 사용할 수 없습니다.