Mouse Direct PCR Kit (For Genotyping)

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제품 비교

설명

Mouse Direct PCR Kit은 마우스 유전자형 분석을 위해 특별히 고안된 빠른 준비 및 PCR 증폭을 제공합니다. Buffer L과 Protease Plus는 마우스 Protocol of Selleck Mouse Direct PCR Kit

1. 다른 방법 간의 비교

시약	가격 ($)	유전자형 분석 방법
시약	가격 ($)	NaOH-HCL	Proteinase K	Selleck Direct PCR Kit
Lysis Buffer	Sigma, 0.010	+	+	Buffer L
Proteinase K	Sigma P6556, 1U/reaction, 0.034		+	Protease Plus
Phenol Chloroform	Sigma P3803, 200μL/reaction, 0.116	+	+
Alcohols	Sigma I9030, 459836, 0.084	+	+
Taq	NEB M0273X, 1U/reaction, 0.122	+	+	2 x M-PCR OPTI^TM Mix
dNTP	Sigma GE28-4065-64, 0.25mM, 0.066	+	+
MgCL₂, DNA Loading	Sigma, 0.010	+	+
Price ($) /Reaction		0.41	0.44	0.39

2. PCR 결과 비교 (야생형 마우스)

Comparison of PCR results from wild-type mouse

레인 1-10은 다른 PCR 프라이머를 나타냅니다. 이 중 두 개는 음성 대조군(레인 9 및 10)으로, 형질전환 마우스 샘플을 사용할 때만 밴드를 표시합니다. 따라서 Mouse Direct PCR kit는 더 높은 PCR 특이성을 보장하여 과학 연구를 위한 신뢰할 수 있는 제품입니다.

3. 장점

Advantages of the Selleck Mouse Direct PCR Kit

결과 분석:
Mouse Direct PCR Kit는 마우스 꼬리, 귀 및 발가락 샘플 준비에 적용됩니다. 55℃에서 15분 또는 30분 동안 소화시킨 그룹 간에 유의미한 차이는 관찰되지 않았습니다. 이 키트는 큰 단편(예: 3Kb)의 증폭에도 효과적입니다.
참고: 500bp 및 3Kb 단편 증폭용 프라이머는 마우스 GAPDH 유전자를 기반으로 설계되었으며, 1Kb 및 2Kb 단편용 프라이머는 마우스 Ppip5k2 유전자를 기반으로 설계되었습니다.

4. 구성 요소

Complete Kit	B40013 (200 rxns)	B40015 (500 rxns)
Buffer L	20 mL	25 mL x 2
Protease Plus	0.4 mL	1 mL
2 x M-PCR OPTI^TM Mix (Dye Plus)	1 mL x 2	1 mL x 5
User Guide	1	1

Buffer L: 용해 완충액.

Protease Plus: 단 15분 만에 마우스 조직을 빠르고 효율적으로 소화시킵니다!

2x M-PCR OPTI^TM Mix: Selleck의 상표 등록 및 최적화된 Taq DNA 중합효소, dNTP, MgCl₂ 및 반응 완충액을 포함합니다.

보관 (수령일로부터)

2 x M-PCR OPTI^TM Mix와 Protease Plus는 -20°C에서 2년 동안 보관해야 합니다. PCR Mix를 자주 사용하는 경우 4°C에서 최대 10일 동안 보관할 수 있습니다.

Buffer L은 4°C에서 보관해야 합니다.

프로토콜

1. 실험 프로토콜

1) 게놈 DNA 준비
마우스 꼬리, 귀 또는 발가락을 1.5 mL 원심분리 튜브에 넣으십시오. 별도의 튜브에 신선한 Buffer L 100 μL와 Protease Plus 2 μL를 단일 샘플용으로 철저히 혼합하십시오. 프로테아제 혼합물을 마우스 조직 튜브에 넣고 조직이 잠기도록 한 다음, 55°C에서 15분 동안 배양하십시오. 소화 과정 후, 95°C에서 5분 동안 배양하여 프로테아제를 불활성화시키십시오. 이제 조직 용해물을 PCR 주형으로 사용할 수 있습니다.

2) PCR 유전자형 분석
권장 농도에 따라 dd H₂O, 프라이머, 주형 및 2 x M-PCR OPTI^TM Mix를 PCR 튜브에 넣으십시오. 혼합물을 원심분리기로 빠르게 돌린 다음 PCR 증폭기에 넣어 증폭을 시작하십시오. PCR 반응은 얼음 욕조에서 준비하는 것이 좋습니다.

PCR 반응 구성 요소	20 μL 반응 부피 (μL)	50 μL 반응 부피 (μL)
ddH₂O	8	21
정방향 프라이머 (10 μM)	0.5	1
역방향 프라이머 (10 μM)	0.5	1
주형	1	2
2 x M-PCR OPTI™ Mix	10	25

PCR 단계	온도 (°C)	시간	주기
1	94	5 min	1
2	94	20 sec	35
3	50-65	30 sec
4	72	X min (2 kb /min)
5	72	5 min	1
6	12	--	1

참고: 첫 사용 전
1. 이 키트의 모든 시약은 함께 사용하도록 최적화되었으며, 어떠한 수정이나 대체 사용도 금지됩니다.
2. 각 단계에서 키트의 모든 시약이 사용 전에 잘 혼합되었는지 확인하십시오.
3. 조직 소화 단계에서 튜브를 1-2회 흔드는 것이 게놈 DNA 방출에 도움이 될 것입니다.
4. 대부분의 마우스 조직 샘플의 경우 55°C에서 15분 동안 배양하는 것으로 게놈 DNA 추출에 충분합니다. 조직은 여전히 손상되지 않은 것처럼 보일 수 있지만 추출은 완료되었습니다.
5. 추출된 마우스 게놈 DNA는 PCR 증폭 단계 직전에 즉시 사용해야 합니다. 부적절한 장기 보관은 PCR 증폭의 신뢰성을 떨어뜨릴 수 있습니다.

문제 해결

기술적인 어려움이 발생하면 다음 문제 해결 옵션을 검토하십시오. 또는 Selleck 기술 지원에 직접 문의하십시오.

문제	잠재적 원인	제안 사항
테스트 또는 대조군 샘플에서 증폭 산물 없음	증폭 반응이 잘못 설정됨	적절한 반응 설정을 최적화하십시오
	부적절한 보관으로 인해 PCR 시약의 활성이 손실됨	모든 구성 요소를 신선한 시약으로 교체하십시오
	프라이머가 최적이지 않고 어닐링되지 않음	프라이머를 재설계하십시오
증폭은 대조군 샘플에서는 작동했지만 테스트 샘플에서는 작동하지 않음	소화가 불완전함	55°C에서 소화 시간을 최대 30분으로 연장하십시오
	샘플을 너무 오래 보관하여 게놈 DNA가 분해됨	게놈 DNA 추출을 위해 신선한 마우스 꼬리 샘플을 수집하십시오
	용해 용액이 PCR 혼합물과 너무 오래 혼합됨	PCR 반응은 주형 추가 후 5시간 이내에 시작해야 하며, 그 동안 4°C에서 보관해야 합니다
	증폭 산물의 양이 충분하지 않음	더 많은 증폭 산물을 얻기 위해 PCR 주기 수를 35-40으로 늘리십시오
비특이적 증폭 산물	어닐링 온도가 너무 낮음	어닐링 온도를 높이십시오
	PCR 주기 수가 너무 높음	주기 수를 30-35로 줄이십시오
	프라이머 농도가 너무 높음	프라이머 농도를 줄이십시오
	주형 농도가 너무 높음	정제된 H₂O 또는 TE 버퍼에 주형을 희석하십시오

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