Anti-DYKDDDDK Tag magnetic beads

장점

제품 비교

설명

Anti-DYKDDDDK Tag 자기 비드는 고품질 재조합 마우스 단일클론 항체와 공유 결합된 하이드록실 자기 비드를 기반으로 합니다. DYKDDDDK-태그 단백질의 높은 로딩(0.6 mg 단백질/mL 이상)과 높은 특이성을 가지고 있어 공동 면역침강 및 단백질 정제에 사용하는 것이 좋습니다.

특성

보관 (수령일로부터)

프로토콜

자기 비드 준비
1. 바이알에 있는 Anti-DYKDDDDK Tag 자기 비드를 현탁시킵니다 (10회 부드럽게 피펫팅하고, 볼텍싱하지 마십시오). 10 µL (필요에 따라 양을 조절할 수 있음)의 Anti-DYKDDDDK Tag 자기 비드 현탁액을 새 튜브로 옮깁니다.
2. 0.5 mL TBS 버퍼 (50 mM Tris HCl, 150 mM NaCl, pH 7.4)를 추가합니다. Anti-DYKDDDDK Tag 자기 비드를 5회 부드럽게 피펫팅합니다. 비드를 용액에서 분리하기 위해 1-2분 동안 (적절하게 5분까지 연장 가능) 튜브를 자석 위에 놓고 상층액을 제거합니다. 이 단계를 2회 반복합니다.
참고: 샘플이 배치 처리되는 경우 모든 자기 비드를 하나의 큰 튜브에 함께 준비한 다음 분할하십시오. 상층액을 제거할 때 너무 세게 흡입하면 일부 자기 비드가 손실될 수 있으므로 부드럽게 흡입하십시오.
단백질 결합
3. 세척된 자기 비드에 세포 용해물 500 µL를 추가합니다. 튜브를 실온에서 2시간 또는 4°C에서 밤새도록 부드럽게 회전시킵니다.
4. 비드를 용액에서 분리하기 위해 1-2분 동안 (적절하게 연장 가능) 튜브를 자석 위에 놓고, DYKDDDDK-태그 단백질 잔류 여부를 감지하기 위해 상층액을 새 튜브로 옮깁니다.
참고: 결합 과정에서 자기 비드가 가끔 뭉치더라도 결과에는 영향을 미치지 않습니다.
자기 세척
5. 튜브에 500 µL PBST를 추가합니다 (NaCl 136.89 mM; KCl 2.67 mM; Na2HPO4 8.1 mM; KH2PO4 1.76 mM; 0.5% Tween20), 부드럽게 피펫팅하여 자기 비드를 재현탁시킵니다. 그런 다음 튜브를 5분 동안 회전시킵니다. 튜브를 자석 위에 놓고 10초 동안 비드를 용액에서 분리하고 상층액을 제거합니다.
6. 5단계를 약 2회 반복합니다. 비특이적 불순물 단백질이 남아있는 경우, 세척 시간을 연장하거나, 세척 횟수를 늘리거나, 세척액 내 세제 함량을 적절히 늘리십시오.
용출 및 검출
하위 사용에 따라 다른 용출 방법을 선택하십시오. IP의 경우 7-8단계로 이동하십시오. 단백질 정제의 경우 저pH 용출을 위해 9-10단계로 이동하십시오.
변성 용출 (Anti-DYKDDDDK Tag 비드를 사용하는 IP 실험에 적합):
7. 표적 단백질의 직접 검출을 위해 위에서 언급된 침전물에 50 µL의 1×단백질 샘플 로딩 버퍼를 추가하고, 5분 동안 끓이고, 실온으로 식힌 다음 튜브를 자석 위에 놓고 비드를 용액에서 1-2분 동안 분리합니다 (적절하게 연장 가능).
8. SDS-PAGE로 상층액을 검출합니다.
경쟁적 폴리 DYKDDDDK Tag 폴리펩타이드 용출 (Anti-DYKDDDDK Tag 비드를 사용한 단백질 정제에 적합):
9. 6단계의 제품에 200 µg-1 mg/mL Poly DYKDDDDK Tag Peptide (B23111)가 포함된 TBS 버퍼를 추가하고, 쉐이커 (4°C)에서 2시간 동안 배양합니다. 일반적으로 Poly DYKDDDDK Tag Peptide의 부피는 젤의 5배입니다.
10. 위 단계의 제품을 자기 분리 장치에 놓고 자기 분리를 수행합니다. 표적 단백질을 포함하는 상층액을 새 EP 튜브로 옮깁니다. 자기 비드를 재사용해야 하는 경우, 0.1 M 글리신 HCl (pH 3.0)로 젤을 세척하고 재활용을 수행하십시오.
저pH 용출 (Anti-DYKDDDDK Tag 비드를 사용한 단백질 정제에 적합):
11. 6단계의 제품에 0.1 M 글리신 HCl (pH 3.0) 용출 버퍼를 추가하고, 쉐이커에서 5분 동안 배양합니다 (용출 시간은 20분 미만이어야 합니다). 일반적으로 용출 버퍼의 부피는 젤의 5배입니다.
12. 위 단계에서 얻은 제품을 5000 rpm에서 30초 동안 원심분리합니다. 그런 다음 용출 제품을 1 M Tris (pH 8.0)로 신속하게 옮겨 pH가 중성에 가까워질 때까지 중화시킵니다.

문제 해결

파일 다운로드

관련 기타 제품