DBeQ p97 억제제

Rapidly and potently induces activation of executioner caspases and cell death.

DBeQ는 HeLa 세포에서 UbG76V-GFP, ODD-Luc 및 Luc-ODC 분해를 각각 2.6 μM, 56 μM 및 45 μM의 IC50으로 차단합니다. 이 화합물은 N-에틸말레이미드 민감성 인자(NSF) 및 26S 프로테아좀에 비해 효능이 최소 50배 낮습니다. 이는 ATP에 대해 경쟁적으로 p97을 억제하며, Ki는 3.2 μM로 D2 도메인의 활성 부위에 결합함을 시사합니다. 이 화합물 (10 μM)은 HEK293 세포에서 TCR -GFP 분해를 강력하게 차단합니다. 농도 의존적인 방식으로 3시간 이내에 CHOP를 유도하지만 HEK293 세포에서 p21 수준을 증가시키지 않습니다. 이 화합물 (15 μM)은 Hela 세포의 핵과 막-농축 및 세포질 분획에서 LC3-II의 강력한 축적을 유도합니다. 이는 HeLa 세포에서 자가포식을 유도하는 대신 LC3-II의 자가포식 분해를 차단함으로써 작용합니다. 이 화합물 (10 μM)은 HeLa 세포에서 “실행자” 카스파제-3 및 -7의 활성화를 빠르게 촉진합니다. STS가 두 경로를 유사한 정도로 활성화하는 반면, 이 화합물은 외인성 카스파제-8 경로보다 내인성 카스파제-9 세포자멸사 경로를 더 활성화합니다. 이 화합물은 정상 인간 태아 폐 섬유아세포(MRC5)보다 다발성 골수종(RPMI8226) 세포에 대해 5배 더 활성이 높으며, HeLa 및 Hek293 세포는 중간 정도의 민감도를 보입니다. [1] HeLa 세포에서 p97 의존성 UPS 리포터 기질 대 독립성 UPS 리포터 기질 안정화에 대해 20배의 선택성을 나타냅니다. 이 화학 물질은 ERAD 및 자가포식 경로 내 기질 분해를 손상시킵니다. [2] 이 (12 μM)는 HeLa 세포에서 용량 의존적인 방식으로 세포 내 중화를 억제합니다. 캡시드 운명 실험에서 바이러스 및 항체 분해를 완전히 억제하는 이 화합물 (10 μM)은 IgG Fc 분해를 막지 못합니다. 이 (9 μM)는 항체 농도의 함수로 중화의 초기 기울기를 감소시킵니다. [3] 이 화합물은 U20S 세포에서 라파마이신의 효과와 유사하게 MTOR 표적의 기저 및 영양분 자극 인산화를 모두 감소시킵니다. [4]

수동 ATPase 분석

분석 버퍼 [2.5배 농도 20 μL, 여기서 1× = 50 mM Tris (pH 7.4), 20 mM MgCl₂, 1 mM EDTA 및 0.5 mM 트리스(2-카르복시에틸)포스핀 (TCEP)]를 96웰 플레이트의 각 웰에 분주합니다. 정제된 p97 (50 μM 25 μL)을 975 μL의 1× 분석 버퍼에 희석하고, 10 μL를 각 웰에 분주합니다. 이 화합물 (10 μL) 또는 5% DMSO (10 μL)를 각 웰에 첨가하고, 플레이트를 실온에서 10분 동안 배양합니다. ATPase 분석은 각 웰에 500 μM ATP (pH 7.5) 10 μL를 첨가하고, 실온에서 60분 동안 배양한 다음, Kinase Glo Plus 시약 50 μL를 첨가하고, 마지막으로 실온 암실에서 10분 동안 배양하여 수행합니다. 발광은 Analyst AD에서 판독합니다. 이 화학 물질은 다양한 농도 (0, 0.048, 0.24, 1.2, 6 및 30 μM)에서 3회 반복하여 분석합니다.