Home Ubiquitin p97 억제제 NMS-873

연구용

NMS-873 p97 억제제

제품 번호S7285

NMS-873은 30nM의 IC50을 가진 알로스테릭 및 특이적 p97 억제제로, 다른 AAA ATPases, Hsp90 및 53개의 추가 분석된 키나아제(IC50 >10 μM) 패널과 비교하여 VCP/p97에 대해 강력한 선택성을 나타냅니다.
NMS-873 p97 억제제 Chemical Structure

화학 구조

분자량: 520.67

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품질 관리

배치: S728501 DMSO]100 mg/mL]false]Water]Insoluble]false]Ethanol]Insoluble]false 순도: 99.91%
99.91

세포 배양, 처리 및 작업 농도

세포주 분석 유형 농도 배양 시간 제형 활성 설명 PMID
Hi5 cells Function assay 20 mins Inhibition of human recombinant His-GST tagged VCP expressed in baculovirus infected Hi5 cells assessed as ADP formation incubated for 20 mins proir to substrate addition measured after 90 mins by NADH coupled assay, IC50=0.024 μM
HCT116 cells Cytotoxic assay 72 h Cytotoxicity against human HCT116 cells after 72 hrs by luciferase reporter gene assay, IC50=0.38 μM
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화학 정보, 보관 및 안정성

분자량 520.67 화학식

C27H28N4O3S2

 보관 (수령일로부터)
CAS 번호 1418013-75-8 SDF 다운로드 원액 보관

동의어 N/A Smiles CC1=C(C=CC(=C1)OCC2=NN=C(N2C3=CN=CC=C3)SC4CCCC4)C5=CC=C(C=C5)S(=O)(=O)C

용해도

In vitro
배치:

DMSO : 100 mg/mL (192.06 mM)
(수분으로 오염된 DMSO는 용해도를 감소시킬 수 있습니다. 신선하고 무수 DMSO를 사용하십시오.)

Water : Insoluble

Ethanol : Insoluble

몰농도 계산기

질량 농도 부피 분자량
희석 계산기 분자량 계산기

In vivo
배치:

생체 내 제형 계산기 (투명한 용액)

1단계: 아래 정보 입력 (권장: 실험 중 손실을 고려하여 추가 동물 포함)

mg/kg g μL

2단계: 생체 내 제형 입력 (이것은 계산기일 뿐 제형이 아닙니다. 용해도 섹션에 생체 내 제형이 없는 경우 먼저 당사에 문의하십시오.)

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

계산 결과:

작업 농도: mg/ml;

DMSO 원액 준비 방법: mg 약물 사전 용해 μL DMSO ( 원액 농도 mg/mL, 농도가 해당 약물 배치의 DMSO 용해도를 초과하는 경우 먼저 당사에 문의하십시오. )

생체 내 제형 준비 방법: 취하다 μL DMSO 원액, 다음 추가μL PEG300, 혼합하고 투명하게 한 다음 추가μL Tween 80, 혼합하고 투명하게 한 다음 추가 μL ddH2O, 혼합하고 투명하게 합니다.

생체 내 제형 준비 방법: 취하다 μL DMSO 원액, 다음 추가 μL 옥수수 기름, 혼합하고 투명하게 합니다.

참고: 1. 다음 용매를 추가하기 전에 액체가 투명한지 확인하십시오.
2. 용매를 순서대로 추가해야 합니다. 다음 용매를 추가하기 전에 이전 추가에서 얻은 용액이 투명한 용액인지 확인해야 합니다. 와동, 초음파 또는 뜨거운 물 중탕과 같은 물리적 방법을 사용하여 용해를 도울 수 있습니다.

작용 메커니즘

특징
The most potent and specific p97 inhibitor described to date.
Targets/IC50/Ki
p97
(Cell-free assay)
30 nM
시험관 내(In vitro)
NMS-873은 트립신 소화에 대한 p97 민감도를 감소시켜 링커-D2 도메인의 분해를 방지합니다. 이 화합물은 p97 억제제로서 다양한 혈액학적 및 고형 종양 세포주에서 항증식 활성을 나타냅니다. 메커니즘 연구에 따르면 이 화학 물질은 펼쳐진 단백질 반응을 활성화하고 자가포식을 방해하여 암세포 사멸을 유도합니다.
키나아제 분석
생화학적 분석 개발 및 HTS
재조합 야생형 VCP 및 그 돌연변이의 ATPase 활성 및 동역학적 파라미터는 변형된 NADH-결합 분석법을 사용하여 반응에서 ADP 형성을 모니터링함으로써 평가됩니다. ADP와 NADH는 VCP ATPase 활성의 ATP 경쟁적 억제제이므로, NADH-결합 분석법의 표준 프로토콜은 두 단계 절차로 수정됩니다. 첫 번째 부분에서는 ATP 재생 시스템(40 U/ml 피루브산 키나아제 및 3 mM 포스포에놀피루브산)이 VCP 활성에 의해 생성된 ADP를 재활용하고, 기질 농도를 일정하게 유지하며(따라서 제품 억제를 방지함), 화학량론적 양의 피루브산을 축적합니다. 두 번째 부분에서는 VCP 효소 반응을 30 mM EDTA와 250 μM NADH로 퀜칭하고, 축적된 피루브산을 감소시키기 위해 40 U/ml 젖산 탈수소효소에 의해 화학량론적으로 산화됩니다. NADH 농도 감소는 Tecan Safire 2 리더 플레이트를 사용하여 340 nm에서 측정됩니다. 분석은 96 또는 384웰 UV 플레이트에서 50 mM Hepes, pH 7.5, 0.2 mg/mL BSA, 10 mM MgCl2 및 2 mM DTT를 포함하는 반응 버퍼에서 수행됩니다. 실험 데이터는 약 60 μM의 Ks*와 2.0 ± 0.1의 힐 계수(n)를 얻는 협동 방정식을 사용하여 피팅됩니다. HTS 캠페인은 1536웰 형식의 소형화된 분석법과 더 민감한 ADP 검출 시스템인 Transcreener ADP FP를 사용하여 100만 화합물 라이브러리에 대해 수행됩니다. 10 nM VCP와 10 μM 억제제의 20분 전배양을 수행한 후, 10 μM ATP를 반응에 추가하고, 퀜칭하기 전에 90분 동안 진행하도록 합니다. 스크리닝의 평균 Z'는 0.58이며, 3× s.d.(38% 억제)를 컷오프로 사용하는 히트율은 1.7%입니다. 10 μM 농도에서 60% 이상의 억제를 보이는 1차 히트는 물리화학적 및 구조적 필터를 사용하여 7,516개 화합물로 줄어듭니다. 최종적으로 3,988개의 1차 히트에 대해 이중으로 재확인을 수행하고, 이전에 설명된 NADH-변형 결합 분석법을 사용하여 용량-반응 평가를 위해 500개의 화합물을 선택합니다. 가장 흥미로운 HTS 히트의 효능은 야생형 VCP와 C522T 돌연변이 모두에 대해 측정됩니다. 각 효소에 대한 반최대 속도(Ks*)를 생성한 ATP 농도(야생형의 경우 60 μM, C522T 돌연변이의 경우 130 μM)가 분석에 사용됩니다. 가역적 억제제의 기질 농도 의존성을 탐색하기 위해, 포화 ATP 농도(1 mM)에서도 효능을 평가하고 표준 ATP 경쟁적 억제제(AMP-PNP)의 효능과 비교합니다.
참조

기술 지원

취급 설명서

Tel: +1-832-582-8158 Ext:3

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